雨蛙素诱发的急性胰腺炎动物模型

急性胰腺炎(Acute pancreatitis, AP)是临床上常见的急腹症，病因复杂，病死率达5%~10%，重症AP死亡率高达20%~30%，目前发病机制尚未阐述，无特殊治疗方式。目前活体AP动物模型制作常用方法大致有胰管结扎法、十二指肠闭袢法、胰胆管穿刺注射法、胰腺被膜下注射法、胰胆管注射法结合静脉输注法、蛙皮素联用脂多糖腹腔内注射法等。

雨蛙素(Caerulein)是一种功能和组成上类似于胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)的胃调节分子，刺激胰腺腺泡细胞过度分泌，使细胞内的胰蛋白酶原和溶酶体水解酶分离障碍，经组织蛋白酶 B依赖性的方式激活，胰酶的活性又能够进一步导致酶原激活，引起一系列蛋白酶活性导致的细胞损害。胰腺组织自我消化引起的炎症反应募集炎症细胞，释放炎症因子，进一步引起局部甚至全身性的严重炎症反应。

图1 雨蛙素分子结构(CAS NO.17650-98-5)

雨蛙素诱导的AP模型已经成功运用于大鼠、小鼠、狗和叙利亚仓鼠等动物AP模型的建立，该模型有助于描述自噬受损、病理性钙信号传导和内质网应激的过程，这些是AP发病机制的核心。可以通过调整雨蛙素的给药方案来增加急性胰腺炎的严重程度。

雨蛙素诱导AP建模步骤

雨蛙素的配制：

取1 mg的雨蛙素溶于1 mL生理盐水中，配制成1 mg/mL母液，0.22 μm滤膜过滤除菌，冻存。使用前解冻，用生理盐水稀释成5 μg/mL或10 μg/mL的工作液。

动物：

雨蛙素可以诱导大多数动物发生AP，但是此类模型主要应用于啮齿类动物（如大鼠和小鼠）。

给药方式:

雨蛙素诱导的AP多为水肿型，多用于轻症AP以及轻症AP转变为SAP研究。雨蛙素诱导重症AP时，往往联合LPS(lipopolysaccharide，LPS)，LPS破坏炎症介质的正常反应，进而发展局部的胰腺炎为全身性的严重性炎症反应，加重在雨蛙素诱发基础上的胰腺炎。

以1小时间隔腹腔注射7次雨蛙素(20-100 μg/kg，常用浓度50 μg/kg)，并在最后一次同时注LPS (10 mg/kg)。

模型判定指标：

1、血清淀粉酶和脂肪酶活性上升；

2、血清中NO浓度升高；

3、胰腺病理学检测：胰腺组织水肿有空泡、炎性细胞浸润，同时伴有少量腺细胞坏死，可能有出血；

4、血清和胰腺组织中炎症因子表达水平增高；

模型优点：

方法操作简便，容易复制，重复性好，无创。

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Cat#60321ES Caerulein应用案例

图2 Yeasen Caerulein (Cat#60321ES) Balb/c小鼠AP造模相关结果(PMID: 35339899, IF: 5.736)

Balb/c小鼠以1小时间隔腹腔注射7次50 μg/kg雨蛙素(Yeasen, Cat#60321ES)，并在最后一次同时注LPS (10 mg/kg)诱导SAP，胰腺H&E图像和组织学评分(b)，以及淀粉酶(c)、IL-6 (d)和ALT (e)的血清水平。

图3 Yeasen Caerulein (Cat#60321ES)昆明小鼠AP造模相关结果(PMID: 27579473, IF: 4.096)

雌性昆明小鼠以1小时间隔腹腔注射4次50 μg/kg雨蛙素(Yeasen, Cat#60321ES)诱导AP。血清中淀粉酶、脂肪酶和TNFα的水平(A)，胰腺H&E图像和组织学评分(C)。