细胞骨架的染色神器-鬼笔环肽

细胞骨架是网状纤维结构，是高度动态的，不同时期有不同的形态。它主要是由微丝，微管和中间丝所组成的。微丝主要是肌动蛋白组成的，肌动蛋白分成肌动蛋白单体（G-actin）和纤维状蛋白单体（F-actin）。微丝的组装就是G-actin 变成F-actin的过程。

鬼笔环肽是一种双环七肽，最早发现的环状肽之一，是从鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）中分离出来的。通过结合和稳定纤维状肌动蛋白（F-actin）发挥功能，并有效防止肌动蛋白纤维解聚。由于其与F-肌动蛋白的紧密和选择性结合，从而显示微丝骨架在细胞中的分布，因此含鬼笔环肽的荧光标记已广泛用于生物显微技术中。

Yeasen生物鬼笔环肽产品种类很多，主要是标记的荧光基团的不同，激发出的荧光颜色不同，对于选择需要机器满足激发和发射波长要求不同，用于区分共染时其他荧光染料的荧光颜色。

实验流程：

鬼笔环肽的配制：

0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇（也可用DMSO或无水乙醇溶解）配成贮存液，可在-20度避光的条件下长期保存，工作液的浓度为5ug/ml，由贮存液加PBS稀释20倍即可。

染色程序：

PBS清洗细胞2次，每次10分钟；3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟，PBS清洗细胞2次；加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟，夏季时间可以短一些，PBS清洗细胞2次；DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟，PBS清洗细胞2次；吸去多余水分，加荧光封片液（中性或偏碱性缓冲液加等量甘油），盖上盖玻片，荧光或共聚焦显微镜下观察。

客户实例：

总结：

荧光和生物素化的鬼笔环肽衍生物，与肌动蛋白抗体相比具有明显优势。鬼笔环肽偶联物的结合不会随物种（包括动植物）的肌动蛋白变化而发生明显改变。此外，他们的非特异性染色可忽略不计。因此染色区和未染色区之间的对比度很高。

注意事项：

1.鬼笔环肽的分子量小，很容易通过细胞，不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。

2.毒性较大，戴上手套操作。

产品特点：

（1）亲和力高：Kd= 20 nM；

（2）特异性强：选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合；

（3）优于抗体染色：鬼笔环肽无物种限制，且几乎不存在非特异性染色，染色区和非染色区域对比性极其明显；

（4）灵敏度高：纳摩尔浓度（nM）染色即可满足实验要求；

（5）兼容性好，肌动蛋白活力不受影响：鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Da，标记后的肌动蛋白许多生理特性都得以维持；

（6）适用范围广：无物种差异性；同样适用于甲醛固定和打孔处理后的组织样本。

FAQ：

Q1：鬼笔环肽染色可以在活细胞中进行吗？

A：鬼笔环肽的染色需要对样品进行固定和透化，帮助鬼笔环肽和F-actin的结合，得到更好的染色效果。

Q2：我的细胞样品转染了带有GFP的质粒，我应该选择哪一款鬼笔环肽？

A：可以选择TRITC（橙色），iFluorTM 555（橘色）或是iFluorTM 647（远红）标记的鬼笔环肽。

Q3：染色贴壁细胞，每个样品大概需要多少工作液？

A：染色贴壁细胞只需要染色工作液能够完全覆盖细胞即可。

Q4:几种不同的鬼笔环肽的区别是什么，如何选择？

A:是荧光基团的不同，激发出的荧光颜色不同，用于区分共染时其他荧光染料的荧光颜色，对于选择需要机器满足激发和发射波长要求。

Q5:鬼笔环肽染色存在种属区分吗？

A:对于动物活细胞染色，不区分种属。

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