小鼠免疫球蛋白M(IgM)酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：小鼠免疫球蛋白M(IgM)酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、或其它组织液中免疫球蛋白M(IgM)。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中小鼠免疫球蛋白M(IgM)水平。用纯化的抗-小鼠IgM抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠免疫球蛋白M，再与HRP标记的羊抗小鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠免疫球蛋白M呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白，(IgM)浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行实验。

2．待检血清1：200稀释：具体为在试管中先按1：20稀释待检血清（190μl样品稀释液中加10μl待检血清，混匀），再按1：10稀释待检血清（取90μl的样品稀释液加10μl  1：20稀释过的待检血清，混匀即可）

3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

4．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（2.4μg/ml，1.6μg/ml ，0.8μg/ml，0.4μg/ml， 0.2μg/ml）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15