免疫组织化学（IHC）是检测生物标记物表达的最简单方法之一，它可以原位检测组织或细胞的标志物。但在真正操作过程中，问题还是层出不穷。当你的IHC结果不理想时，就要静下来，逐步分析找其原因。除了抗体和试剂很重要之外，各实验操作细节的好坏，也是影响IHC染色结果的重要因素。
本文着重介绍，如何进行抗原修复（Antigen Retrieval）？
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抗原修复是影响IHC染色强度的因素之一，通过加热样本或用酶处理样本便可完成抗原修复。在这个视频中，我们将重点关注热诱导的表位修复，或简称为HIER。在对样本进行脱蜡以及在添加抗体来检测靶蛋白之前，进行抗原修复。抗原修复会去除因醛基固定而形成的交联，并解旋蛋白的二级和三级结构，使抗体能够检测表位。对于深埋在蛋白结构中的表位，这一点尤其重要。
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在你的标准HIER实验步骤中，将样本浸入缓冲液中，并煮沸一段时间，通常为10-20分钟。常用加热方法包括水浴、微波炉或高压锅。这些方法的修复程度各不相同，水浴效果最差，高压锅效果最好。CST的IHC实验步骤建议使用微波炉，它对抗原修复是有效的，并且你的实验室中很可能就有这个设备。
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配置1x柠檬酸盐缓冲液，或EDTA，向您的容器装入250mL这种缓冲液。用空白玻片填满玻片夹的所有空槽。这将确保各个实验之间缓冲液和热分布一致。将盖子稍微留一条缝隙，释放压力，因为这可确保缓冲液不会沸溢并露出玻片顶部。此外，过度加热玻片会导致缓冲液流失，从而使组织变干燥。这可能会产生假阴性结果。抗原修复中的一个常见错误操作是沸腾过度，这会导致组织从玻片上脱落。为了优化微波炉加热时间和功率，我们建议进行预实验。将24个空白玻片放入250ml缓冲液中，并确定达到起初沸腾时间。接下来，确定维持亚沸温度8-10分钟所需的功率级别。确定微波炉的条件后，每次都以相同的方式进行修复，始终使用等量的缓冲液，并用空白玻片填满空槽。
你可以在cellsignal.cn的产品页面上找到各抗体的特定应用的完整实验步骤。如果您对某种抗体或实验步骤有任何疑问，您联系我们全国免费技术热线4006-473287（GreatQ），或邮箱tech@cst-c.com.cn。祝您实验成功！
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