产品介绍:
HG-Trans293TMtransfection reagent是最新研发的基于纳米颗粒技术为基础的适用于HEK 293和HEK293T等各种人胚肾293细胞高效转染的一款核酸转染试剂。由于采用纳米技术为依托,可以使核酸转染HEK 293细胞的成功率达到95%以上。并且对细胞毒性较小,细胞的存活率得到了很大提升。
转染提示:
1. 建议用无血清的培养基稀释转染试剂和核酸。
2. 转染过程中,培养基不可加抗生素,抗生素的添加会影响细胞的转染效率和毒性。
3. HG-Trans293TMtransfection reagent极大的简化了转染过程,转染试剂可直接加入混合好的质粒稀释液,无需分别进行稀释。混合好的核酸-转染试剂复合物合静置后可直接加入含血清的细胞培养集中进行转染
产品规格:
名称 |
规格 |
|
TG-10014-1 |
0.5ml |
|
TG-10014-2 |
HG-Trans293TMtransfection reagent |
1ml |
保存条件:
4℃(切勿冷冻);有效期12个月。
实验步骤:
转染前
转染前提前一天将合适比例的HEK293细胞接种于细胞培养板中(详细接种量见附录:表二),以第二天转染时,细胞密度达到70%~90%汇合度为宜。
1. DNA转染过程(以24孔板为例)
a. 将0.4 μg DNA用50μl的无血清培养基稀释,并混合均匀。(无血清培养基可选择OPTI-MEM或无血清DMEM)
b. 吸取1.0 μl的HG-Trans293TMtransfection reagent加入步骤a混合好的DNA稀释液中,混合均匀,室温静置30min。核酸-转染试剂复合物制备完成。
备注:
c. 将制备好的核酸-转染试剂复合物加入到含细胞和完全培养基的培养孔中,水平方向上下左右轻轻晃动培养板,使其混合均匀。(本转染试剂适用于含血清的完全培养基,可有助于提高细胞的转染效率和存活率)
d. 放置37℃细胞培养箱培养,4-6h换液,然后继续培养18~48h后荧光显微镜下检测转染效率。
2. siRNA转染过程
siRNA的转染过程遵循上面DNA的转染过程。
附录:
表一:DNA和siRNA在不同细胞培养容器中的转染用量
细胞培养容器 |
表面积(cm2) |
DNA转染 |
siRNA转染 |
核酸转染试剂混合稀释液总体积(每孔) |
培养基总体积(每孔) |
||
DNA |
HG_TransGene |
siRNA转染 |
HG_TransGene |
||||
96-well |
0.3 |
0.1 μg |
0.25 μl |
5 pmol |
0.25 μl |
25 μl |
100 μl |
24-well |
2 |
0.4 μg |
1.0 μl |
20 pmol |
1.0 μl |
50 μl |
500 μl |
12-well |
4 |
0.8 μg |
2.0 μl |
40 pmol |
2.0 μl |
100 μl |
1 ml |
6-well |
10 |
2 μg |
5.0 μl |
100 pmol |
5.0 μl |
250 μl |
2 ml |
60-mm/T25 flask |
20 |
4 μg |
10 μl |
200 pmol |
10 μl |
0.5 ml |
4 ml |
100-mm/T75 flask |
60 |
12 μg |
30 μl |
600 pmol |
30 μl |
1.5 ml |
12 ml |
表二:不同培养容器中的细胞接种量
细胞培养板 |
96-well |
24-well |
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