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今天我们说的是样本处理的注意事项。
样本预处理不规范
1、 实验器械&容器&试剂配制未经去RNA酶处理
所有可能接触到组织的器械、容器、试剂(包括清洗样本的生理盐水/PBS)都必须经过去RNA酶处理。
2、 样本收集及处理时间过长
组织离体后应在5min内用液氮浸没迅速降温 。
3、采样后未能迅速降温
干冰或低温冰箱的降温速度较缓慢,若样本直接放进冰箱或干冰中,因降温过慢未能及时抑制RNase的活性而引起样本降解,应该在最短时间内,将样本迅速投入液氮,彻底冷冻后再转移到-80℃ 。
4、样本运输过程中干冰不足
运输过程中要保证样本深埋在干冰内部,所有的样本应各自装好袋,然后统一的放在一个大管中或一个袋子中,以防收样的时候有样本遗漏,使用厚壁的泡沫盒,以减缓干冰挥发的速度,液体样本要用封口膜封口。
5、 样本不分装
整块大体积的组织样本不利于长期保存,RNA提取时需对大块的样本进行分样操作,此过程容易引起样本降解,建议分装成小量多份。
6、 RNAlater中的组织体积过大
用RNAlater保存的组织必须切成长宽高≤0.5cm的小块,确保样本在运输的过程中始终浸没在RNAlater中,不允许用RNAlater保存液体样本,液体样本会与RNAlater发生互溶无法分离。
7、 样本名称无法辨别
用油性的防冻记号笔标注上样本名称,样本编号不能过于简单,保证编号的唯一性,编号要以数字加字母组合,不允许使用中文编号。
8、 样品泄漏
内存液体的样品管(酒精/Trizol),应使用封口膜封紧管口以防样品泄漏。
9、 样品管破损
用进口冻存管保存组织样本,可以避免普通离心管在运输的过程中因为受力不均导致样品管破碎。勿直接让纱布袋、塑料袋接触样本。
10、含有色素及不溶性杂质的RNA样本
RNA样本如果含有色素及不溶性杂质,通常会影响后续实验,建议将RNA纯化后再进行寄送(带色素的样本中通常植物居多如花、根、果实、藻;虾蟹的眼柄也会有) 。
好了,RNA提取专题小课堂就到这里了。
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