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Taq antibody提高PCR扩增特异性的机制

作者:苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 2022-05-19T16:44 (访问量:3390)

 

非特异性扩增的一个常见来源是DNA聚合酶对错配序列的延伸和引物二聚体的形成。虽然DNA聚合酶在低温条件下的活性较弱,可以通过在冰上制备PCR反应混合物来减少非特异性扩增;然而,在 PCR 反应第一步升温过程中DNA聚合酶仍可催化错配引物延伸或引物二聚体形成,因而导致非特异性扩增,影响目的片段的合成。因此,提高PCR特异性更加有效的方法是使用热启动DNA聚合酶。其中,Taq antibody修饰的热启动酶因其快速的热启动速度和较高的灵敏度获得了广泛的应用

 

 

 

Taq antibody修饰热启动酶的作用原理

 

 

Taq DNA聚合酶与其抗体(Taq antibody)结合后,活性受到高效封闭,经过95℃ 30s的热启动,Taq antibody在高温下变性,并从Taq DNA聚合酶活性中心脱落,Taq DNA聚合酶的活性得到释放。通过使用Taq antibody封闭Taq DNA聚合酶常温下的活性,从而避免引物错配引起的非特异性扩增,提高扩增特异性。

 

 

 

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近岸蛋白提供严格质控的高品质Taq antibody(Cat. No.:Z087),帮助您获得高特异性的PCR结果。

 

 

产品特点

 

 

  • 高效亲和Taq DNA聚合酶,精准封闭酶活

  • 热启动快,DNA预变性的同时即可释放Taq酶活

  • 高稳定性,37℃放置0-7天对Taq DNA聚合酶的封闭效果无影响

  • 严格质控,无核酸内切酶/外切酶、RNase、DNase残留等

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近岸蛋白Taq antibody性能数据

 

1、 特异性检测

 

50μl扩增体系中,以50ng人基因组DNA为模板,对特定基因片段(170bp)进行扩增,经Taq antibody修饰的Taq DNA聚合酶相比未经修饰的Taq DNA聚合酶,扩增特异性显著提高。

 

 

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采用对照公司及Novoprotein Taq antibody与Taq DNA 聚合酶孵育得到热启动酶做目标基因扩增,同成品热启动酶(Control)比较扩增效果,Novoprotein Taq antibody孵育的热启动酶特异性更好。

 

 

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2、 重复性检测

 

与成品热启动酶(Control)及对照公司(Test1)相比,Novoprotein Taq antibody(Test2)孵育的热启动酶重复性更好。

 

 

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3、 扩增效率检测

 

与成品热启动酶(Control)及对照公司(Test1)相比,Novoprotein Taq antibody(Test2)孵育的热启动酶的扩增效率更好。

 

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4、 多重扩增检测

 

与成品热启动酶(Control)相比, Novoprotein Taq antibody孵育的热启动酶能很好地对低至1ng模板进行10-20重PCR扩增。

 

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5、 稳定性检测

 

Taq antibody在37℃放置0-7天后封闭Taq DNA聚合酶进行扩增,结果无差异。

 

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6、 RNase残留检测

 

配制2个20μl体系,每个体系中加入4μl RNA,一管做阴性对照,另一管加入1μl Taq antibody后,37℃下消化30min,RNA未被消化,证明无RNase残留。

 

 

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扩增体系中RNase Inhibitor的加入与否不影响扩增Ct值,证明无RNase污染。

 

 

 

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7、 DNase残留检测

 

 

100bp DNA Ladder中分别加入1U 2U 10U Taq antibody,-20 ℃及37℃保温2小时后,电泳检测 DNA Ladder完整性,结果证明无DNase污染。

 

 

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感谢客户友情提供部分数据图。

 

 

 

      近岸蛋白产品信息

 

货号

产品名称

规格

Z087

Taq antibody

250U / 250U×5


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数量有限 先到先得

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