Amplite™人类载脂蛋白D（ApoD）试剂盒*针对ELISAPro自动ELISA处理进行了优化*
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V101045                   
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产品详细介绍

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简要概述


Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂，以方便，可靠，特异的方式方便地定量测定血清，血浆和细胞培养上清液中的分析物。




ELISA测定原理
ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体（mAb）。样品中的分析物被包被的mAb捕获，并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP（SA-HRP）检测。注：TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应，并且可以使用ELISA板酶标仪定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。




血清和血浆样品分析
ELISAPRO试剂盒包括Apo ELISA缓冲液，一种可防止假阳性信号的缓冲液。缓冲液可阻止嗜异性抗体交联测定抗体。嗜异性抗体通常存在于人血清/血浆中，也可以存在于其他物种中。缓冲液已使用来自健康人类献血者的血清/血浆样品进行了验证。




所需材料

    
酶标仪可在450 nm读取
    
ELISA平板清洗器；自动或手动（例如，多移液管或喷射瓶）•精密移液管，吸头和量筒
    
用于标准和样品稀释的试管
    
蒸馏水或去离子水 




安全信息
Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）对眼睛和皮肤有刺激性，应小心处理。由于不知道暴露的影响，因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG（0.002％），这是一种潜在的过敏原，可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息，请查阅我们网站上的《安全数据表》。




制备
在开始测定之前，让板和测定试剂达到室温（TMB底物除外，最好使用冷底物）。

计划板布局，使其一式两份，包括标准曲线，样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。




产品说明书


样品实验方案
 

储备溶液配制
1.洗涤缓冲液
将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中（足以完成1个板的所有洗涤步骤）。如果在20倍浓缩物中形成了晶体，则将其升至室温并轻轻混合以溶解。




2. Apo ELISA缓冲液
用蒸馏水或去离子水将Apo ELISA缓冲液浓缩液稀释5倍，以制备所需体积的Apo ELISA缓冲液。对于每个板，将30 ml Apo ELISA缓冲液浓缩液添加到120 ml水中。




3.样品
所有样品均应在Apo ELISA缓冲液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释，应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。含有超出分析标准范围的高水平分析物的样品将需要进一步稀释。




4.人血清/血浆稀释指南
根据对空腹健康受试者的反复分析，我们建议稀释系数为20,000X。精确的移液非常重要，在稀释步骤之间更换吸头，并使用新鲜制成的稀释液。试剂的数量足以重复使用。




5. ELISA标准
通过添加230ul标准重构缓冲液将ELISA标准液重构为2μg/ ml的储液，请勿搅拌。让标准液溶解20分钟。标准液应等份保存在-20°C下。避重复冻融循环。




6.编制标准曲线
如图所示，稀释标准储备溶液以创建标准曲线。试剂的数量足以重复使用。最后一个样品瓶用作测定背景对照，即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。



工作溶液配制

1.检测抗体

在使用15分钟内，将检测抗体在Apo ELISA缓冲液中稀释至0.5μg/ ml的浓度。对于每个板，在12 ml Apo ELISA缓冲液中稀释12μl检测抗体。



2.链霉亲和素

在使用后的15分钟内，将抗生蛋白链菌素-HRP用抗生蛋白链菌素-HRP稀释剂稀释1000倍。对于每块板，在12 ml的链霉亲和素-HRP稀释液中稀释12μl的链霉亲和素-HRP。

 

操作步骤



    
用洗涤缓冲液（300μl/孔）洗涤板5次。最后一次洗涤后，将其倒置并用吸水纸吸水。然后立即进行下一步。
    
添加样品（至少稀释2倍），标准液和测定背景对照（100μl/孔）。敲击板混合。用粘性板盖覆盖板，并在室温下孵育2小时。
    
如上所述清洗板。
    
添加检测抗体（100ul/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
    
如上所述清洗板。
    
加入抗生蛋白链菌素-HRP（100μl/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
    
如上所述清洗板。
    
添加TMB底物（100ul/孔）。在避开直射光的室温下孵育15分钟。
    
如上所述清洗板。
    
在15分钟内测量450 nm处的吸光度。如果可能，请使用能够减去570至650 nm参考波长的酶标仪。