T4 RNA连接酶1

描述：催化 3’→5’磷酸二酯键的形成，使核苷酸的 5’-磷酸末 端和 3’-羟基末端连接，伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作 用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸，它可催化 ssDNA 和 RNA 的连接，相对于 ssDNA，该酶对 RNA 分子 的连接和环化效率更高。 组分 名称 1000U T4 RNA Ligase1 (10 U/μl) 100 μl 10×T4 RNA Ligase Buffer 250 μl 10mM ATP 100 μl 50% PEG 8000 500 μl 应用  连接单链 RNA 和 DNA  RNA 3’末端标记  RNA 和 DNA 分子内和分子间连接  合成单链寡脱氧核苷酸  蛋白质中掺入非天然氨基酸 储存：-20℃可保存 3 年。 活性定义：1 单位指在 1×T4 RNA Ligase Buffer 中，37℃ 条件下，30 分钟内将 1nmol 的 5’-[ 32P]rA16 转化为磷酸盐不 溶物质所需要的酶量。 使用注意事项 （1）1×T4 RNA Ligase Buffer：50 mM Tris-HCl pH 7.5， 10 mM MgCl2，1 mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度 1 mM ATP。 （2）最佳反应温度 37℃，65℃ 10min 可使该酶失活。 （3）该酶的连接底物无论是 ssDNA 还是 ssRNA 均需要 5’- 磷酸化或预腺苷化。 （4）该酶不能连接双链 DNA 或 RNA。 （5）加入终浓度 5~10% PEG 8000 或增加孵育时间可提高 连接效率。 使用方法 1、ssDNA 和 RNA 的连接反应 （1）配制如下反应体系 （20 μl） RNA 或 ssDNA 底物 0.2-2 pmol 10 X Reaction Buffer 2 μl PEG8000 5~10% (wt/vol) T4 RNA Ligase 1 μl ATP( 10 mM ) 2 μl 灭菌水 upto 20 μl （2）37℃反应 30-60min，或 25 度反应 1-2h。 （3）65℃15min，终止反应。 2、RNA 环化反应 (1) 配制如下反应体系 （20μl） RNA 10 μM 10 X Reaction Buffer 2 μl PEG8000 5~10% (wt/vol) T4 RNA Ligase 1 μl ATP 20-50 μM Rnase inhibitor 0.5 μl 灭菌水 upto 20 μl (2)37℃反应 30-60min，或 25℃反应 1-2h。 (3) 65℃15min，终止反应。

T4 RNA 连接酶1催化3’→5’磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羟基末端连接，伴随着ATP水解为AMP和PPi。T4 RNA 连接酶1的作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸，它可催化ssDNA和RNA的连接，相对于ssDNA，该酶对RNA分子的连接和环化效率更高。
组分
组分名称 数量 T4 RNA Ligase1 (10 U/μl) 100μl 10×T4 RNA Ligase Buffer 250μl 10mM ATP 100μl 50% PEG 8000 500μl
应用
连接单链RNA和DNA RNA 3’末端标记 RNA和DNA分子内和分子间连接 合成单链寡脱氧核苷酸 蛋白质中掺入非天然氨基酸
活性定义
1单位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中，37℃条件下，30分钟内将1nmol的5’-[32P]rA16转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。
储存
-20℃可保存3年。
使用注意事项
1.1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度1mM ATP。 2. 最佳反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。 3. 该酶的连接底物无论是ssDNA还是ssRNA均需要5’-磷酸化或预腺苷化。 4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。 5. 加入终浓度5~10% PEG 8000或增加孵育时间可提高连接效率。

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