说明

ONE-Glo^™ + Tox Assay （ONE-Glo^™ + Tox 检测试剂盒）将萤光检测方法与细胞活力标记物结合起来，从而在细胞健康的环境下，更好地理解报告基因的表达情况。该试剂盒采用两步法，只需加入试剂，就可在同一平板的单一检测孔内进行这些检测，而无需进行平行检测。

该检测法的第一部分是利用 CellTiter-Fluor^™ 细胞活力检测试剂盒（CellTiter-Fluor^™ Cell  Viability  Assay ）进行的非裂解性荧光检测，用于检测实验处理后细胞群落中活细胞的相对数量。 CellTiter-Fluor^™ 细胞活力检测试剂盒检测的是活细胞蛋白酶的活性，该蛋白酶为保守的组成性表达蛋白，因而可以作为细胞活力的标志物。活细胞蛋白酶活性仅存在于完好的活细胞内，是通过一种可产生荧光并可穿透细胞的多肽底物 (glycylphenylalanyl-aminofluorocoumarin ， GF-AFC) 来检测的。该底物进入完整的细胞后，被活细胞蛋白酶切割，产生荧光信号，该信号的强度与活细胞数量相关（图 1 ）。当细胞膜的完整性丧失并渗漏到周围培养基中后，该活细胞蛋白酶即失活。自由的 AFC 荧光基团可用微孔板酶标仪或 CCD 成像仪来检测，激发光波长为 380–400nm ，发射光波长为 505nm 。

该试剂盒的第二部分是利用 ONE-Glo^™ 萤光素酶检测系统（ONE-Glo^™ Luciferase Assay System ）定量萤火虫萤光素酶报告基因在所转入细胞内的表达（图 2 ）。随系统提供的 ONE-Glo^™ 萤光素酶检测缓冲液（ONE-Glo^™ Luciferase Assay Buffer ）与 ONE-Glo^™ 萤光素酶检测底物（ONE-Glo^™ Luciferase Assay Substrate ）混合得到 ONE-Glo^™ 试剂（ONE-Glo^™ Reagent ）。 ONE-Glo^™ Assay 含有一种新的萤光素酶底物，使得反应更稳定，对样品组分耐受性更强，比标准的萤光素酶检测试剂产生的异味更少。这些特点使得 ONE-Glo^™ Assay 的表现更强劲，并减少了高通量条件时使用其他报告基因检测试剂盒带来的操作不便。

发光信号用微孔板酶标仪或 CCD 成像仪来检测。

特点

•  高效： 在同一检测孔内检测细胞活力和萤火虫萤光素酶基因表达，得到更多细胞检测相关数据。

•  具有更好的生物学意义：在细胞活力环境下，理解报告基因的表达情况。

•  易于操作： 该检测法使用简单的“加入 - 混合 - 读数”模式（图3）。

•  灵活，易于自动化： 每个检测组分的体积都可以进行扩展，来满足高通量的需求，适于进行高达 1,536 孔板的自动化操作。

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