Golden MLV Reverse Transcriptase

描述：Golden MLV Reverse Transcriptase 反转录酶是 在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去 除了 RNase H 活性中，从而避免反转录过程中降解 RNA。 同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受 55℃ 高温反应。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录 可显著打开 RNA 二级结构，从而提高复杂 RNA 模板的扩增 性能、提高反转录 cDNA 的长度和产量，从而提高后续检测 的灵敏度。 组分 名称 10KU 50KU Golden MLV Reverse Transcriptase (200 U/μl) 50 μl 250 μl 10×RT Buffer 500 μl 1mlx2 单位定义：以 poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在 37°C 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性 沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。 储存：-20°C 可保存 3 年。 操作方法 1. 按以下组分配制反应体系 Golden MLV Reverse Transcriptase 0.5-1 μl 10×RT Buffer 2 μl dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg 20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.5 μl RNase Free H2O Up to 20 μl *注：Oligo dT(25) 使用浓度为 20~50 μM, 如使用 Random9 随机引物可使用 125 μM，基因特异性引物可使用 5 μM。 2．在 PCR 仪上按下列条件进行反转录反应 30°C 15 min 55°C 30~60 min 85°C 10 min 4°C 3. 反转录所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于 -20°C。

Golden MLV反转录酶是海基在鼠源病毒反转录酶基础上进行改良而得的第四代反转录酶，通过定点突变去除了RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受55℃高温反应。相比于传统42℃条件下反转录反应，采用55℃反转录可更好地打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，因此能更好地提高后续检测的灵敏度。
组分
组分名称 数量 Golden MLV Reverse Transcriptase (200 U/μl) 50 μl/250 μl 10×RT Buffer 500 μl/1 ml×2
单位定义
以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在37°C条件下，10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。
储存
-20°C可保存2年。
反应实例
Fig . 应用Golden MLV Reverse Transcriptase和T公司MLV 反转录酶反转录鸡肌肉组织和人心脏组织总RNA获得cDNA，然后分别扩增500bp、1642bp和1926bp(79%GC含量)的PCR产物。M:DNA Marker 2000，泳道1、2、3分别为T公司MLV反转录酶42°C、海基Golden MLV反转录酶42°C和海基Golden MLV反转录酶55°C。

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