产品编号：HZ1011（序号1-6），HZ1011（序号1-7）

储存温度：序号1-6 常温保存；序号7需-20℃储存，蓝冰运输

产品组成：（0.5 L/pouch）

产品说明：

   Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酵母单杂培养基套装试剂盒HZ1010），含有用于Y187-pHis2系统酵母单杂交文库筛选的全套培养基。整套销售，性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装，每个独立包装可以配制0.5 L的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加入0.5 L的ddH2O，然后121 ℃灭菌15分钟即可。无需称量和调整pH值。

   Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit （HZ1011）在试剂盒YM1010基础上增加了100 ml 3-AT溶液（2.5M，过滤除菌）。

使用方法：

Rich Liquid Media (Broth)

1. 序号1产品YPDA每袋干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5 L的去离子水中溶解。

2. 无调整pH值。121℃高压灭菌十五分钟。

3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基备用。

Rich Plating Media with Agar

1.序号2产品YPDA with Agar每袋干粉倒入三角瓶中，加0.5 L的去离子水中溶解（琼脂高压灭菌后溶解）。

2. 无调整pH值。121℃高压灭菌15分钟。

3. 冷却到50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱备用。

Minimal Liquid Media

1. 序号3产品，每袋干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5 L的去离子水，搅拌溶解。

2. 无调整pH值。121℃高压灭菌15分钟。

3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。

Minimal Plating Media with Agar

1. 序号4、5、6产品，每袋干粉倒入三角瓶中，加0.5 L的去离子水，搅拌溶解（琼脂高温灭菌后溶解）。

2. 无调整pH值。121℃高压灭菌15分钟。

3. 冷却到50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。

3-AT的使用方法：

   HIS3作为报告基因时，会有一定程度的泄漏性表达，出现背景过高的现象，一般称作自激活。这时可以在筛选培养基中加入适量的HIS3竞争性抑制剂3-AT（3-amino-1,2,4-triazole），以降低背景；或者增加一个筛选标记Ade来进行更加严格的筛选。加入的3-AT浓度过高，蛋白间比较弱的相互作用也可能被抑制，因此需要确定3-AT的最适浓度。

使用方法：

1.计算所需平板的数量，计算配置培养基体积；

2.设置3-AT的浓度梯度(建议设置10-50mM 的浓度梯度，常见浓度约30mM )；

3.灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55℃左右，加入3-AT 母液，摇匀后倒板；

4.标记每个平板的3-AT浓度，超净台冷却凝固后，将转化或培养物涂板；

5.28-30℃培养 3-5天。

注意：

   理想情况 10mM浓度的3-AT平板会有少量生长，20mM浓度的3-AT不能或极少生长。如在80mM浓度的3-AT平板上生长的酵母不能用于双杂交筛选。自激活活性太高而不能进行双杂交筛选。