支原体高效清除剂，2000 ×说明书

Mycoplasma Efficient Removal Agent

产品描述

支原体污染是细胞培养领域的世界性问题，世界各国的细胞支原体污染平均比例为30~60%。支原体直径约为 0.1~0.3μm，具有变形能力，可透过常见过滤膜(0.22~0.45μm)，因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，常用的抗生素也对支原体无效。

支原体可通过细胞之间交叉污染，操作人员的口腔、皮肤造成污染、血清等添加物而带入污染。由于支原体无法通过常规的光学显微镜观察到，不会引起培养基混浊，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。

支原体会消耗必须氨基酸，影响细胞生长速率，造成代谢物累积，改变细胞形态，影响DNA、RNA、蛋白质的合成，抑制细胞因子表达，改变被污染细胞的基因表达谱，诱导染色体畸变。

逸漠支原体高效清除剂经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，能以较低的浓度杀灭支原体，不仅可用于细胞株/系，还可应用于敏感和较脆弱的细胞，如干细胞和原代细胞。本产品仅12小时就可以显著抑制支原体生长，1~2周左右即可清除支原体污染，且不影响细胞本身的代谢，完美兼具特异性和高效清除支原体的特点，且对细胞温和无损伤，最大程度上挽救您的珍贵细胞。

产品优势

高效性，12h即可有效抑制支原体的增殖；

高特异性，特异性清除支原体；

无耐药性，活性成分为多肽类，不会产生耐药性；

高利用率，未被利用的成分可降解为氨基酸被细胞利用；

高安全性，对细胞几乎无毒性，已在上百种细胞上验证。

质量控制

通过支原体、真菌、支原体、内毒素检测。

通过渗透压、pH 检测。

通过产品性能检测。

运输与保存方法

冰袋运输;

-20℃避光保存，保质期2年；

使用方法

从-20℃冰箱内取出支原体高效清除剂，将试剂管瞬时离心(3000rpm，3~5s)后放置于EP管架上，用75%的酒精喷洒试剂管的表面，在生物安全柜中进行无菌操作；

以T25细胞培养瓶为例

清除支原体污染操作规程

对于已检测或怀疑有支原体污染的细胞，在细胞培养基中加入适量支原体高效清除剂，通常推荐使用的稀释倍数为2000×，如：6 mL的细胞培养基加入3 μL的支原体高效清除剂混匀。连续加药培养1~2周即可有效清除支原体污染。

若支原体污染较严重，可酌情增加药物浓度以提高清除支原体的效率，推荐尝试最小稀释倍数、中间稀释倍数、最大稀释倍数三个浓度进行测试。以细胞系(成纤维样)为例，建议将细胞分为三份，分别采用500×、1000×、2000×三个浓度进行支原体清除。若500×对细胞生长无明显影响，可采用500×浓度快速清除支原体，若500×对细胞生长有明显影响，则采用1000×浓度清除支原体，连续加药培养1~2周(或传代3次)后，检测是否还存在支原体污染。如果还存在支原体污染，可继续培养1周。

注意：可参考下表选择稀释倍数，达到最佳清除效果。

预防支原体污染操作规程

若细胞需长时间培养，建议每2~3周进行定期预防。在细胞培养基中加入适量支原体高效清除剂，通常推荐使用的稀释倍数为3000×，如：6mL的细胞培养基加入2μL的支原体高效清除剂混匀。连续加药培养1~2周，即可有效防止支原体污染或抑制支原体增殖。

注意：可参考下表选择稀释倍数，有效预防支原体污染。

实验流程图

特别提醒

①使用本试剂前请仔细阅读说明书；

②本产品经0.1 μm 过滤除菌，使用本产品时无需过滤，可直接加入培养基使用；

③本试剂具有专利技术，-20℃保存时不冻结，使用时无需解冻，从-20℃取出即可使用；

④为了发挥最好的药效，含药培养基建议现配现用，如果加药培养基未用完，于4℃冰箱中避光保存，2周内用完，使用培养基前需预热至37℃；

⑤贴壁细胞换液或传代前，弃去旧的培养基，用含1000×支原体高效清除剂的PBS轻轻冲洗细胞表面2次。悬浮细胞、贴壁不牢的细胞、半贴半悬细胞换液或传代前，可利用支原体直径远小于细胞直径的特点，采用150 g(或900 rpm)低速离心5mins，弃去旧的培养基，再用含1000×支原体高效清除剂的PBS轻轻冲洗细胞2次；

⑥用含药PBS清洗细胞后，加入含有支原体高效清除试剂的新鲜完全培养基(传代后铺细胞需更换为新的瓶/板)，1天换液1次， 连续加药4~7天，或者2天换液1次，连续加药7~14天，若细胞污染非常严重时，需增加换液频率和延长处理时间；

⑦若细胞污染严重，且需要快速清除支原体时，即可采用高浓度药物(500×~1000×)进行清除，传代后，为了防止药物影响细胞贴壁，建议待大部分细胞贴壁后再加入药物，即先用完全培养基重悬细胞，铺瓶，0.5~2h后在培养基中加入对应稀释倍数的支原体高效清除剂，轻轻混匀，放入培养箱继续培养；

⑧在添加了本试剂的细胞培养基中培养1~2周后，推荐使用支原体PCR检测试剂盒判断是否还存在支原体污染；

⑨本试剂可以有效抑制或去除多种支原体，但并不能确保可以去除实际实验操作过程中遇到的任何类型的支原体。由于细胞可能会污染多种支原体，如遇污染极其特殊的支原体类型，可先用支原体高效清除剂处理1~2周后，使用支原体清除试剂Plus进行后续1~2周的支原体清除处理，2~3周后即可清除全部支原体；

⑩如遇个别细胞对本试剂敏感，细胞生长速度明显受影响时，建议减量使用或进行稀释度测试；

⑪支原体高效清除剂处理后，会有很好的预防和清除效果，但是如果环境或使用试剂中仍有污染源存在，细胞可能会再次污染，因此需做好适当的预防措施；

⑫加入本产品进行支原体预防和清除时，无需添加双抗(青霉素-链霉素)；

⑬为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

⑭本产品仅供研究或进一步生产使用，不得用于诊断或治疗。