DEAE Agarose 6FF(DEAE弱阴离子交换层析填料6FF)
产品名称: DEAE Agarose 6FF(DEAE弱阴离子交换层析填料6FF)
英文名称: DEAE Agarose 6FF(DEAE弱阴离子交换层析填料6FF)
产品编号: 20540ES25
产品价格: 0
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2023-08-17T13:40:59
使用范围: null
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产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
DEAE Agarose 6FF(DEAE弱阴离子交换层析填料6FF) |
20540ES25 |
25 mL |
300.00 |
20540ES60 |
100 mL |
788.00 |
|
20540ES76 |
500 mL |
3600.00 |
产品描述
离子交换树脂主要包括强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
本品DEAE弱阴离子交换树脂以高度交联的6%琼脂糖为介质,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品离子交换基团-N+(C2H5)2H。
产品性质
基质(Matrix) |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
粒径(Bead size) |
45-165 µm |
离子交换类型(Type) |
弱阴离子 |
载量(Capacity) |
~0.11-0.16 mmol Cl-/mL 基质 |
流速(Flow Rate) |
300-700 cm/h |
pH范围(pH Range) |
2-12(长期)/ 2-14(短期) |
储存缓冲液(Buffer) |
20%乙醇 |
运输和保存方法
冰袋运输。4-30℃保存,有效期5年。
使用方法
1 缓冲液的准备
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 装柱(使用储液器装填)
1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。
2)将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
4)打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速, 这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的最大流速, 这样也可以得到一个很好的装填效果(【注】在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%)。当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5)关闭泵,关闭层析柱出口。
6)如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。
7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
4 样品纯化
1)将介质装入合适的层析柱,层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)将样品加到平衡好的DEAE Agarose 6FF中(保证目的蛋白与填料充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
5 SDS-PAGE 检测
将得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。
6 填料清洗
离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP(Cleaning In Place)清洗
离子交换树脂可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
1)去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。