产品内容：

试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入40mL试剂一；

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入2.5mL 试剂二；

标准品：液体0.5mL×1支，4℃保存。10μmol/mL 谷氨酸标准品。

产品说明：

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH₄⁺，引起340nm处吸光度的上升，通过测定340nm吸光度的变化，计算谷氨酸含量。

试验中所需的仪器和试剂：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、谷氨酸提取

细菌、细胞或组织样品：收集细胞或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），10000rpm，常温离心10min，取上清待测。

称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，10000 rpm，常温离心10min，取上清待测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的制备

将标准品分别稀释为2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039μmol/mL的标准溶液。

3、 在1 mL石英比色皿中加入下列试剂：

（1）标准管：在1 mL石英比色皿中加入200μL标准溶液、800μL试剂三和50μL试剂四混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。

（2）测定管：在1 mL石英比色皿中加入200μL样本、800μL试剂三和50μL试剂四混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2，计算∆A=A2-A1。

三、谷氨酸含量计算

1、 标准曲线的绘制：

以谷氨酸含量（μmol/mL）为x轴，标准管∆A为y轴，绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值。

2、氨基酸含量计算：

（1）按照蛋白浓度计算

谷氨酸含量（μmol/mg prot）=x×V样本÷（Cpr×V样本）=x÷Cpr。

（2）按照样品质量计算

谷氨酸含量（μmol/g鲜重）=x×V样本÷（W÷V样总×V样本）=x÷W。

（3）按照细菌或细胞密度计算

谷氨酸含量（μmol/10⁴ cell）＝x×V样本÷（1000÷V样总×V样本）=0.001x。

V样总：加入提取液体积，1mL；V样本：加入的样本体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；1000：细菌或细胞总数，1000万。

注意事项：

为提高检测灵敏度，测定管的吸光值应小于1且∆A小于0.4，若大于此值则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定。

 相关文献：

《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang，Chengzhen Liang，Zhigang Meng，Yanyan Li，Muhammad Ali Abid，Muhammad Askari，Peilin Wang，Yuan Wang，Guoqing Sun，Yongping Cai，Shou-Yi Chen，Yi Lin，Rui Zhang，Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影响因子:3.712 PMID: