诺如病毒检测试剂盒
产品名称： 诺如病毒检测试剂盒
英文名称： Norovirus rapid test
产品编号： NRBD-1
产品价格： 0
产品产地： 中国
品牌商标： Darwin
更新时间： null
使用范围： null
广州纳特生物科技有限公司
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诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）
1. 用途
用于体外诊断。 诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法）是用免疫层析的方法快速定性测定人粪便样本中，基因 1 型（ GG1 ）和基因 2 型（ GG2 ）的诺如病毒。该试剂可以协助诊断胃肠炎，分析有疑似诺如病毒胃肠炎症状的儿童和成人的粪便样本。
2. 检测摘要与说明
诺如病毒：是一个引起世界性感染的胃肠炎的主要原因，估计美国每年约有 23 ， 000 ， 000 的病例（ 1 ， 2 ）。该病毒经常在公共场所中爆发，如育婴室、医院、托儿所、监狱和油轮（ 3 ， 4 ， 5 ）。诺如病毒爆发的 报导比细菌性致病原所致爆发的报道要更常见，说明诺如病毒对公共健康有很相当的影响（ 6 ）。
诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法），应用单克隆抗体，快速、可靠地检测粪便标本中的抗原，从而使病人能够尽快开始治疗。这种快速检测可以直接地、敏锐地同时检测诺如病毒基因 1 型和基因 2 型抗原。尤其适合检测样本数量少的样本。
3. 检测原理
诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法）为快速、多步法侧流免疫层析检测，应用了抗诺如病毒抗原的单克隆抗体。在加样孔旁的反应窗内，有两条包被了固定抗体的平行线。检测线（ T ）包含了抗诺如病毒抗原的抗体。质控线 C 包含了抗鼠 IgG 的抗体。酶标记物 1 包含了生物素化的抗诺如病毒抗原的抗体，酶标记物 2 是由结合了辣根过氧化物酶的链霉菌抗生物素蛋白组成。检测过程中，先从已经准备好的粪便样本悬浊液中，吸取一定量的上清液，与一定量的酶标记物 1 混合，加入检测卡较小的窗口中（加样孔）。经过室温下 10 分钟的孵育后，样本和酶标记物混合液被检测膜吸收后，在过滤片上移动。在这个过程中，诺如病毒阳性标本中的抗原 - 酶标记物复合物，与检测线上固定的抗诺如病毒抗体结合，没有结合抗原的生物素化的抗体则结合在质控线上。之后加入酶标记物 2 ，在室温下孵育 1 分钟，结合了过氧化物酶的链霉菌抗生物素，与通过特异性抗体而固定在膜上的生物素结合。
在反应窗加入洗液，洗掉没有结合的过氧化物酶。如果测试为诺如病毒阳性，加入底物后三分钟，在检测线（ T ）上就会出现蓝线，同时质控线（ C ）上也会出现蓝线。如果质控线没有变蓝，说明这次检测的操作存在问题，结果不可以用于诊断。
4. 试剂盒组成
试剂盒内的试剂足够进行20次检测
测试卡 Cassette 20 次检测 内装 20 个独立包装的测试卡
稀释缓冲液 Diluent 30 ml 样本稀释缓冲液，氯化钠蛋白缓冲液，即用，含 0.1% Kathon CG; 开瓶即用，蓝色
洗液 Wash 10ml 洗液，磷酸化的氯化钠，含 0.1% Thimerosal ，开瓶即用
酶标记物 1 Conjugate1 7ml 稳定蛋白溶液中的生物素标记的抗诺如病毒抗体，开瓶即用，蓝色
酶标记物 2 Conjugate2 5ml 稳定蛋白溶液中的链霉菌过氧化物酶，开瓶即用
底物 Substrate 7ml 过氧化氢 /TMB ，开瓶即用
吸液管 Pipet 25 支 每包中装有 25 支有刻度标记 的一次性塑料吸样管
5.必要的实验室试剂和设备
小试管及试管架，用于悬浮粪便样本，（如Eppendorf的反应管）
漩涡混匀器
一次性手套
计时器
含0.5% 的次**钠溶液的废液容器
用于取粪便标本的一次性接种环或刮板
6. 操作注意事项
1.仅用于体外诊断。
2.实验必须由经过专业培训的人员操作。必须严格按照医学实验室的规章制度操作。
3.产品操作时必须严格按照说明书操作。
4.样品稀释缓冲液中含有Kathon CG作为防腐剂，此物质不能接触皮肤或粘膜。
5.样本和试剂不可以用嘴吸取。
6.样本和试剂避免接触受伤的皮肤或者粘膜。
7.处理样本时应该戴一次性手套，完成试验后要洗手。
8.禁止在样本和试剂实验区域内吸烟、吃东西或喝水。
9.所有试剂和材料如果接触有潜在感染性的样本，应与样本一样，立即用适当的消毒剂（如次**钠）或者高压高温121℃至少1小时处理。
10.诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法）必须在效期内使用。所有的试剂都被调整为最适宜的活性状态。稀释或改变这些试剂将减少其活性。如果不按照说明中指定的时间和温度进行操作，将会导致错误的结果。
11.不同批号的诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法）试剂盒中的试剂不可以混用。
12.试剂和样本必须避免微生物的污染，否则将会影响检测结果。
13.吸取每个样本时，必须使用不同的吸管，以防止交叉污染及错误结果
14.每个检测卡只可使用一次
7. 使用时间和储存方法
2－8 °C保存，必须在有效期前使用。过有效期之后，产品的质量保证不再有效。同样，如果检测卡的外壳破损将会使检测卡潮湿，我们将不能保证检测卡适合使用。
8. 质量控制－试剂失效说明
在加入样本上清液前，试剂盒的外壳必须是完整，否则不能进行检测。除了在质控线（C）有浅红的颜色，检测膜上应看不见任何颜色改变或是条带出现。此外，孵育检测后，至少会出现蓝色的质控线（C），否则请在重复检测前，检查以下几点：
- 检测卡及稀释缓冲液有效期
- 操作过程是否按说明书进行
- 稀释缓冲液是否被污染
以上情况检查无误后，请取用新的检测条重测。如果质控色带依然没出现，请联系生产商或者当地公司分销商。
9. 标本采集与存放
粪便样本必须使用没有任何添加剂的干净容器收集，试验前应储存于温度为2-8 °C。在病人症状出现後（腹泻和呕吐），应尽快进行样本采集，因为症状出现后1-3天，病毒的清除达到最大化。如果标本保存时间超过3天，必须储存于-20 °C。在实验开始前，冷冻的样本必须充分解冻，回复至室温。与新鲜样本一样，复温的样本也必须在检测前，和试剂充分混合。应避免样本多次冻融。
采用直肠拭子采集样本时，必须得到足够的粪便标本（大约100 mg）以确保检测进行。
10. 样本和试剂准备
检测前，样本、样本稀释液、试剂和检测卡必须恢复至室温（20 - 25 °C）。检测卡必须在即将使用前才可以从外包装中取出，检测卡一旦从外包装中取出或被使用，则不可以再次使用。检测不可以在阳光直射下进行。
10.1. 准备样本悬浊液
取1 ml样本稀释缓冲液Diluent加入贴好标签的试管内。对于液态粪便样本，可用盒内的一次性吸液管Pipet吸取100 μl标本（至吸液管的第二个增粗处），悬空滴加于事先已加入提取缓冲液的标记试管中；对于固态粪便样本，取50-100mg标本（豌豆大小）加入缓冲液中。样本必须被混匀，可利用试管反复吸放，或者用漩涡混匀器将粪便悬浮液混匀。至少沉淀2分钟后，取200 - 500 μl上清液置于另一干净试管中（或者未包被的微孔中）。
11. 检测程序
1、将检测卡Cassette从外包装中取出，将其放置在水平的垫子上。
2、用已经处理过同一标本的一次性吸管，从粪便悬浊液中吸取250 μl上清液（第一个标记处），加入干净的、标记的试管中。
3、在试管中加入6 滴酶标记物1 Conjugate│1（滴加时保持小瓶垂直）。
4、通过吸放的方式将混合液彻底混匀后，用一次性吸管将其全部吸出，以缓慢平稳连贯的水流，注入检测卡的加样孔中。将吸管倾斜约 45°，管口指向反应窗，这样混合物就可以全部流至反应窗内。
5、将检测卡在室温下（20 - 25 °C）孵育10 分钟。确保反应窗的检测膜已被样本混合液充分浸湿，否则请将100 μl 稀释缓冲液滴入加样孔中。
6、在反应窗中加入4 滴酶标记物2 Conjugate│2（滴加时保持小瓶垂直），再于室温下孵育至少1分钟。
7、在反应窗中，加入10滴洗液Wash，待洗液被完全吸收后，再进行后续操作。
8、在反应窗中加入6 滴底物液Substrate（滴加时保持小瓶垂直）。
9、之后的3分钟内，读出检测结果。在3分钟后出现的有色条带，没有诊断意义。
12. 结果解释
1、在加入底物后3 分钟之内，在良好采光直视下读出的检测结果，是最可靠的。
2、查看在反应窗的“C”标记处，是否有出现蓝色的条带（所谓的内部质控线），在反应窗的“T”标记处是否出现蓝色的条带（所谓的检测线）。颜色的强度可能会由浅变深。
3、阳性结果：加入底物之后3 分钟内，如果同时出现两条蓝色的条带（检测线“T”和质控线“C”），可判别为阳性结果。颜色可由浅变深。如果条带只有部分清晰出现，也可以解释为阳性。膜的其他颜色改变或其他部位的阴影，都不能解释为阳性结果。
4、阴性结果：加入底物的3 分钟后，就可以开始判别是否为阴性结果或无效结果了。如果只在反应窗的质控带“C”处出现蓝色的条带，在检测带“T”处没有蓝色条带出现，则可判定为阴性结果。阴性结果说明，在样本中没有诺如病毒的抗原存在，或抗原的量低于检测限。
5、无效结果：在反应窗的检测带“T”和质控带“C”处，均无蓝色条带出现，或者只在检测带“T”出现条带，这两种情况均说明检测无效，需要用新的检测卡重新进行检测。
13. 质量控制
最多只有两条色带出现。如果质控带（C）没有出现，则说明检测无效，检测结果不能被用于临床的评价。出现蓝色的质控条带，说明样本和试剂操作是正确的，检测过程中的试剂是有活性的，样本在检测膜上的移动也是适合的。结果区域（反应窗）的无色背景的作用相当于内部阴性质控。如果检测的操作正确，而且试剂的功能正常，背景将会是无色的，从而使结果清晰可见。
14. 方法局限性
诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法）用于检测基因1 型和基因2 型的诺如病毒，如果病毒量没有低于试剂的检测限，则可以检测该种病毒是否在粪便样本中出现。粪便样本是否取样于胃肠炎病人的症状表现期，对结果的影响是非常重要的。检测中出现蓝色条带的颜色强度，不能反应临床症状的严重程度，只能提示粪便样本中的病毒抗原量。条带的蓝色可以从很浅的颜色变为很深的颜色。
阳性结果不能排除存在其他病原体感染。在样本中可能同时存在两种及以上的病原体，需要进行鉴别的检测以确诊。双重或多重感染的症状会比一种感染引起的症状严重。
阴性结果不能排除诺如病毒的存在或诺如病毒是引发胃肠炎的原因。此种情况可因以下原因发生：间歇性病毒排出、或者粪便样本中病毒含量过低，样本采集时间不当，运输或储存条件不适合。如果病人高度怀疑病原体感染，应再重新留便复查。
15. 预期评价
全世界范围内70%的非细菌性胃肠炎的流行都是由诺如病毒引发的，也是引起肠炎爆发的最常见原因，50%的肠炎爆发均由诺如病毒引起。由于其在公共场所的频繁出现，所以诺如病毒也经常引发散发的腹泻。继轮状病毒后，诺如病毒是引发儿童胃肠炎和成人感染的最常见原因。因为诺如病毒存在基因变化，一旦感染，病人通常不会出现终生免疫。
因此，阳性检测结果与特定人群的诺如病毒发病率、基因型的转换和病人的环境有关。样本的采集、运输和储存方法，也会影响检测结果的阳性率。
16. 性能特点
在验证实验中，用诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法）检测113例粪便样本。样本从胃肠炎患者的粪便中采集，既有散发病例，也有爆发病例。样本收集于2007-2008年的冬季，在德国汉堡的城市地区采集。在当地的卫生研究所，用RT-PCR的方法检测新鲜的样本后，将样本冻存。2008年7月，将冰冻的样本融化后，在与之前相同的实验室，用诺如病毒快速检测试剂卡（免疫层析法）和已上市的RIDASREEN® 诺如病毒检测试剂盒（酶联免疫法），同时进行检测，结果与RT-PCR进行对比。