产品内容：
试剂一：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加6 mL蒸馏水充分震荡溶解。
试剂三：粉剂×1管，4℃保存。临用前加入蒸馏水1.5 mL充分震荡溶解。
试剂四：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入12 mL蒸馏水，充分震荡溶解后，缓缓加入400μL浓硫酸（自备），边加边搅拌。
标准品：液体1mL×1支，4℃保存。1μmol/mL 磷标准溶液。
产品说明：
GCL（glutamate cysteine ligase）是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。
在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。
自备仪器和用品：
冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取： 
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
二、GCL测定操作：
1. 分光光度计或酶标仪预热30min，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2. 将标准液稀释10倍，即稀释成0.1μmol/mL 磷标准溶液
3.  加样表：
试剂
对照管
测定管
标准管
空白管
试剂一（μL）
48
48
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
试剂二（μL）
52
52
试剂三（μL）
12
12
样品（μL）
-
24
混匀后盖紧，37℃水浴准确反应15min；
试剂四（μL）
60
60
样品（μL）
24
-
混匀后，室温（25℃左右）10000rpm，离心10 min；
上清（μL）
100
100
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