RCA滚环扩增试剂盒

描述：滚环扩增（rolling circle amplification，RCA）是新近 发展起来的一种恒温核酸扩增方法。以环状 DNA 为模板， 通过一个短的 DNA 引物（与部分环状模板互补），在 phi29 DNA 聚合酶催化下将dNTPs转变成单链DNA，此单链DNA 包含成百上千个重复的模板互补片段。这种方法不仅可以直 接扩增 DNA 和 RNA，还可以实现对靶核酸的信号放大，灵 敏度达到一个拷贝的核酸分子，因此在核酸检测中具有很大 的应用价值和潜力。本试剂盒配置的 phi29 DNA 聚合酶具有 链置换和连续合成特性，可连续合成长达70kb的DN**段。 另外，该酶具有 3’→5’外切酶校读功能，合成的 DNA 片段 保真性高。试剂盒配备的 Random Hexamers 为 6 碱基随机 引物可对目标分子进行指数放大（通常放大 10000 倍）。 组分 名称 100T phi29 DNA Polymerase (20 U/μl) 50 μl 10×phi29 Buffer 1 ml Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl) 25 μl 10mM dNTP Mixture 200 μl 25XRandom Hexamer 100 μl 储存：-20℃可保存 3 年。 操作方法 1. 配置反应液 10×phi29 Buffer 2.5 μl 10mM dNTP Mixture 2 μl 25XRandom Hexamers 1 μl 模板 DNA 0.01-20 ng ddH2O up to 25 μl 2. 变性退火 将上述产物置于 PCR 上，93°C 变性 3min，25°C 5min。 3. 向上述退火产物中加入 0.5μl phi29 DNA Polymerase 和 0.2μl Yeast Pyrophosphatase，混合均匀后放置到 30°C 反 应 2~16h（根据所需的产物量进行反应时间调整，通常分别 在 2h、5h、16h 进行电泳确认）。 4. 反应结束后 65°C 10min 进行失活反应。 注意： RCA 扩增还可应用于其它缺刻或诊断相应的实验，此时 Random Hexamer 为非必须品。

滚环扩增（rolling circle amplification，RCA）是近几年发展起来的一种核酸恒温扩增方法。以环状DNA为模板，通过一个短的DNA引物（与部分环状模板互补），在phi29 DNA 聚合酶催化下将dNTPs转变成单链DNA，此单链DNA包含成百上千个重复的模板互补片段。这种方法不仅可以直接扩增DNA和RNA，还可以实现对靶核酸的信号放大，灵敏度达到一个拷贝的核酸分子，因此在核酸检测中具有很大的应用价值和潜力。 因其高灵敏度、高特异性和可操作性，RCA技术在基础研究、实际检测、医疗诊断及纳米材料等方面都有很好的应用，结合细胞原位检测、单核苷酸多态性SNPs，蛋白质分析、免疫芯片和全基因组的扩增等研究都能发挥其巨大的优势。 本试剂盒配备的phi29 DNA聚合酶具有链置换和连续合成特性，可连续合成长达70kb的DN**段。另外，该酶具有3’→5’外切酶校读功能，合成的DN**段保真性高。试剂盒配备的Random Hexamers为6碱基随机引物可对目标分子进行指数放大（通常放大10000倍）。

主要特征

高灵敏度：单引物RCA的扩增效率成指数扩大，可达104-105。 操作简单：恒温扩增，程序简单化。 仪器简单：只需维持恒温的水浴锅。 应用广泛：可广泛应用于基础研究和医疗诊断等领域。

组分

名称 100T phi29 DNA Polymerase (20 U/μl) 50 μl 10×phi29 Buffer 1 ml Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl) 25 μl 10mM dNTP Mixture 200 μl 25XRandom Hexamer 100 μl

储存

-20℃可保存3年，避免反复冻融。

实例

1. 应用本试剂盒以pEasy质粒为模板， 30℃作用5h。泳道1-5是模板浓度分别为0.0004，0.004， 0.04，0.4，1 ng/μl ，泳道6-10分别为泳道1-5相对应的RCA产物用PstI酶切后的产物，M 为D10000 DNA Marker。

2. 应用本试剂盒以人基因组为模板， 30℃作用5h。泳道1-6是模板浓度分别为 0.0004，0.002，0.004，0.04，0.4，1 ng/μl ，M 为D10000 DNA Marker。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！