产品组成：

注意：

1：过硫酸铵（APS）为固体粉末，使用前配制成10% APS溶液（0.1 g APS加1ml双蒸水）。APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存两周。如干粉出现严重结块，可能变质，请联系厂家更换APS。

2：制胶液不需要添加TEMED可以达到常规聚合速度。如果需要加快聚合，可以适当加入TEMED。参考加入比例为0.001 mL / mL制胶液。

产品简介：

1：每种浓度的凝胶制备试剂盒只可用于单一分离胶浓度的SDS-PAGE胶的制备；

2：无需自备试剂，按比例加入APS后即可灌胶。

操作步骤：

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

一、灌制分离胶

1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

2.注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

3.按照 0.04 mL 10% APS溶液/ 4mL 分离胶制胶液的比例配置分离胶溶液，吹打混匀。

4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini- gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端 1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

5.静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

注意：分离胶溶液剩余未灌注部分，可用于对照检测分离胶是否聚合

二、灌制浓缩胶

1．去除覆盖在分离胶上的水层。

2．按照 0.01 mL 10% APS溶液/ 1 mL 浓缩胶制胶液的比例配置浓缩胶溶液，吹打混匀。

3. 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。

7．待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

8．进行常规电泳操作。

注意：浓缩胶溶液剩余未灌注部分，可用于对照检测浓缩胶是否聚合。

注意事项：

1. APS溶液不稳定，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换10% APS。

2. PAGE凝胶的凝聚速度受温度影响，室温较低是，可以增加50%-100%的APS使用量。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。