动物/植物miRNA提取分离试剂盒
产品名称: 动物/植物miRNA提取分离试剂盒
英文名称: miRNA Isolation Kit from Plant/Animal
产品编号: HZ0129
产品价格: 0
产品产地: 中国/上海
品牌商标: 沪震生物
更新时间: 2023-08-17T10:24:20
使用范围: null
- 联系人 : 鲍丽雯
- 地址 : 上海市闵行区闵北路88弄1-30号第22幢AQ136室
- 邮编 : 200612
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****0749 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : www.shzbio.net
- 二维码 : 点击查看
动物/植物miRNA提取分离试剂盒
中文名称:动物/植物miRNA提取分离试剂盒
英文名称:miRNA Isolation Kit from Plant/Animal
产品规格:50次
本试剂盒是基于吸附柱法开发的miRNA提取分离试剂盒,能高效的提取长度为20 - 200ntmiRNA,siRNA,snRNA等小片段RNA,同时也能进行总RNA的提取。高效的裂解液能轻松裂解各种组织,细胞等。吸附柱采用特殊的硅基质膜填料,大大增强了其对RNA的吸附能力,尤其是small RNA(< 200nt)。提取物可用于Northern blot analysis,Quantitative,real-time RT-PCR,Microarray analysis。
产品特点:
·能高效、准确分离20 - 200nt的小RN**段。
·功能全面,除了小片段的提取,还能进行总RNA提取
·操作简便,一个小时内即可完成所有操作。
·纯度高,提取的RNA没有DNA和蛋白污染,方便进行下游实验的分析。
提取实例:
使用本试剂盒提取30mg小鼠肝脏的miRNA Ct值比传统异丙醇沉淀方法提取的miRNA Ct值更小
使用本试剂盒提取30mg小鼠肝脏样本的miRNA吸收峰曲线图,此图可以证明本试剂盒提取的miRNA比传统的异丙醇沉淀方法提取的miRNA纯度更高。
试剂盒组成:
储存条件:室温(15-25℃),裂解液MZ应在2-8℃避光保存。
预防RNase污染,应注意以下几方面:
1.经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。
2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3.RNA在裂解液中不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4.配制溶液应使用无RNase的水(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1% (v/v),放置过夜,高压灭菌)。
操作步骤:
第一次使用前应在漂洗液RW和去蛋白液MRD中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。
一、组织或细胞中miRNA富集部分的提取
对miRNA的纯度要求较高时,比如在研究miRNA芯片、miRNA克隆时建议采用此方法。
1.样品处理
a.组织:将组织在液氮中磨碎。每30~50mg动物组织或者100 mg植物组织加1 ml裂解液MZ,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液MZ体积的十分之一。
b.单层培养细胞:直接在培养板中加入裂解液MZ裂解细胞,每10cm2面积加1 ml MZ。用取样器抽打几次。
注意:裂解液MZ的加入量根据培养瓶面积决定,不是由细胞数决定。如果加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。
c.细胞悬液:离心2,100rpm(400×g)5 min取细胞,弃上清。加入1 ml裂解液MZ,振荡器振荡或移液器吸打数次混匀。加裂解液MZ前不要洗涤细胞,以免降解mRNA。
2.将匀浆样品在室温放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:4℃ 12000rpm (~13400×g)离心5 min,取上清,转入一个新的无RNase的离心管中。
注意:如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等,可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA,RNA存在于上清溶液中。
4.加入200μl氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15 sec,室温放置5 min。
5.4℃ 12000rpm (~13400×g)离心15 min,样品会分成三层:黄色的有机相,中间层和无色的水相,RNA主要在水相中,水相的体积约为所用裂解液MZ试剂的50%。把水相转移到新管中,进行下一步操作。
6.量取转移液的体积,缓慢加入转移液体积0.43倍的无水乙醇(如:500 μl的转移液加215 μl无水乙醇),混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入向吸附柱miRspin中,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,若一次不能将全部溶液和混合物加入向吸附柱miRspin中,请分两次转入,离心后弃掉向吸附柱miRspin,保留流出液。
7.量取流出液的体积,缓慢加入流出液体积0.75倍的无水乙醇(如:700 μl的流出液加525μl无水乙醇),混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱miRelute中,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱miRelute中,请分两次转入,离心后弃掉流出液,保留吸附柱miRelute。
8.向吸附柱miRelute中加入500 μl去蛋白液MRD(请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
9.向吸附柱miRelute中加入500 μl漂洗液RW(请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
10.重复操作步骤9。
11.将吸附柱miRelute放入2 ml收集管中,室温12000rpm (~13400×g)离心1 min,去除残余液体。
注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱miRelute在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。
12.将吸附柱miRelute转入一个新的RNase-Free 1.5 ml离心管中,加15-30 μl RNase-FreeddH2O,室温放置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心2 min。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于15 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次。
二、组织或细胞中Total RNA的提取
对miRNA的纯度要求不高时,比如在研究miRNA RT-PCR、miRNA Northern blot时也可以采用此方法。
1.样品处理(同一、组织或细胞中miRNA富集部分的提取步骤-1)
2.同一、组织或细胞中miRNA富集部分的提取步骤-2
3.同一、组织或细胞中miRNA富集部分的提取步骤-3
4.同一、组织或细胞中miRNA富集部分的提取步骤-4
5.同一、组织或细胞中miRNA富集部分的提取步骤-5
6.量取转移液的体积,缓慢加入转移液体积1.5倍的无水乙醇(如:500 μl的转移液加750 μl无水乙醇),混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱miRspin中,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱miRspin,请分两次转入,离心后弃掉流出液,保留吸附柱miRspin。
7.向吸附柱miRspin中加入500 μl去蛋白液MRD(请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
8.向吸附柱miRspin中加入500 μl漂洗液RW(请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
9.重复操作步骤8。
10.将吸附柱miRspin放入2 ml收集管中,室温12000rpm (~13400×g)离心1 min,去除残余液体。
注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱miRspin在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。
11.将吸附柱miRspin转入一个新的RNase-Free 1.5 ml离心管中,加30-100 μl RNase-FreeddH2O,室温放置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。
注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次。
三、全血、血清或血浆中miRNA富集部分的提取
1.样品处理:每200μl全血、血清或血浆中加入等体积裂解液MZ,振荡器振荡混匀30sec。
2.室温放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。
3.室温12000rpm (~13400×g)离心10min,取上清,转入一个新的无RNase的离心管中。
4.加入200μl氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15 sec,室温放置5 min。
5.室温12000rpm (~13400×g)离心15 min,样品会分成三层:黄色的有机相,中间层和无色的水相,RNA主要在水相中,把水相转移到新管中,进行下一步操作。
6.量取转移液的体积,缓慢加入转移液体积1/3体积的无水乙醇(如:300 μl的转移液加100 μl无水乙醇),混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱miRspin,室温放置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,离心后弃掉吸附柱miRspin,保留流出液。
7.量取流出液的体积,缓慢加入流出液体积2/3体积的无水乙醇(如:300 μl的流出液加200μl无水乙醇),混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱miRelute,室温放置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,离心后弃掉流出液,保留吸附柱miRelute。
8.向吸附柱miRelute中加入500 μl去蛋白液MRD(请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
9..向吸附柱miRelute中加入500 μl漂洗液RW(请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
10.重复操作步骤9。
11.将吸附柱miRelute放入2 ml收集管中,室温12000rpm (~13400×g)离心1 min,去除残余液体。
注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱miRelute在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。
12.将吸附柱miRelute转入一个新的RNase-Free 1.5 ml离心管中,加15-30 μl RNase-FreeddH2O,室温放置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心2 min。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于15 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次;或者增加血清或血浆的样品量并成比例增加裂解液和氯仿的用量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!