大肠杆菌DH10Bac菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌DH10Bac菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌DH10Bac菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌DH10Bac菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC1143 SAECEC-LM 涎腺腺样囊性癌细胞 人 1640 贴壁

EC560 Malme-3M 人恶性黑色素瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC561 HECV-29 人膀胱上皮细胞 人 1640 贴壁

EC840 MECA-RH7777 大鼠肝癌细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC564 HOPEC 人少突胶质前体细胞 人 1640 贴壁

EC1213 SNU-5 人胃癌细胞 人 1640 悬浮

EC535 MiaECaPa-2 人胰腺癌细胞 人 1640 贴壁

EC538 BIU-87 人膀胱癌细胞 人 1640 贴壁

EC542 KM12 人结肠癌细胞 人 IMDM 贴壁

EC990 NP69 人鼻咽癌上皮细胞 人 1640 贴壁

EC958 NECI-H295R 人肾上腺皮质腺癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC541 Karpas-422 人类B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮

EC565 HMVEEC 人微血管内皮细胞 人 1640 贴壁

EC574 HPASMEC 人肺动脉平滑肌细胞 人 DMEM 贴壁

EC543 HK-2 人肾小管内皮细胞 人 DMEM 贴壁

EC305 EECA109 人食管癌细胞 人 1640 贴壁

EC544 NHDF 正常人皮肤成纤维细胞 人 DMEM 贴壁

EC806 LX-2 人肝星形细胞 人 1640 贴壁

EC894 MM.1S 人多发性骨髓瘤细胞 人 IMDM 悬浮

EC545 KYSE270 人食管鳞癌细胞 人 1640 贴壁

EC1282 TE-10 人食管癌细胞 人 DMEM 贴壁