用于Illumina平台的Small RNA-Seq Library Prep Kit试剂盒

•  无需凝胶纯化的用户友好的工作流程

•  5小时内即可完成测序文库的制备

•  投样量范围广泛：从50pg到1000ng RNA

•  针对例如血浆、血清和尿样等RNA含量较低的样品进行了优化

•  内含i7 index，最多可同时对96个样品进行处理。

简介

   自从small RNA (sRNA)被发现在基因表达调控中起到关键作用，研究人员已经对一些非编码small RNA产生了浓厚的兴趣并予以特别关注，比如microRNA (miRNA) 和small interfering RNA (siRNA)。Lexogen公司新推出的Small RNA-Seq Library Prep Kit提供了一种简化的文库制备程序，可在短短5个小时内，从small RNA样品生成可直接用于Illumina测序的文库。该试剂盒可用于投入量为100ng-1000ng的细胞总RNA样品，或者50pg-1000ng富集后的small RNA样品，包括诸如血浆、血清和尿样等RNA含量低的样品。该试剂盒内有制备small RNA文库所需要的所有分子试剂，包括接头、引物、酶、缓冲液等。同时，该试剂盒使用一个基于柱子的模块，可以快速纯化制备过程中生成的核酸产物。该试剂盒中还包括了最多96种外源i7 index，能够制备出含有不同index的多重文库。制备的文库可以与单端或者双端测序兼容。通常，对于Small RNA-Seq文库来说，短的读长（SR50）就足够了。

   通过将全新的Small RNA-Seq Kit与SPLIT RNA Extraction Kit结合在一起，Lexogen提供给用户一套完整的small RNA-Seq文库制备方案：先使用SPLIT富集small RNA，然后使用Small RNA-Seq Kit生成测序文库。

工作流程

   Small RNA-Seq试剂盒是基于将接头分子连接到总RNA或者富集后的small RNA的3’端和5’端上进行工作的。文库的制备始于将3’端接头连接到RN**段上（总RNA，富集small RNA，血浆RNA，血清RNA，尿RNA，或核外RNA），过量的3’端接头会在接下来的柱纯化过程中被去掉，然后将5’端接头连接到RN**段上，从而得到两端分别加上5’端和3’端接头的RN**段。之后RN**段被转成cDNA，接下来扩建cDNA文库，在这一过程中加上完整的接头序列，获取质控和测序所需要的足够多的片段。外部i7 index也在这一步被加到序列上，加入的index可以让多种样品同时进行测序。扩增后的文库接下来通过纯化来浓缩所需片段，同时去除PCR过程中的其它成分，避免其干扰量化结果。绝大多数情况下，特别是当样品RNA为富集的microRNA时，制备好的文库可以直接在Illumina测序仪上进行分析。或者，还可以增加额外的磁珠纯化过程，去除接头-接头干扰片段，或者将small RNA文库从总RNA文库中分离出来，这样就避免了使用small RNA-Seq文库制备过程中常用的较为繁琐的凝胶纯化。如果需要使用磁珠纯化，我们建议使用Lexogen公司的包括了磁珠纯化模块的套餐（目录号 058），最终可以用常用的标准化方法，如微毛细管电泳或者qPCR，来对文库进行定量

图1  Small RNA-Seq Library Prep Kit工作流程示意图