枯草杆菌WB600菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 枯草杆菌WB600菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。枯草杆菌WB600菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 枯草杆菌WB600菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC726 OCI-LY18 人B细胞淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮

EC727 HRMC 人肾系膜细胞 人 DMEM 贴壁

EC728 hREC 人视网膜内皮细胞 人 DMEM 贴壁

EC729 HOCF 人脉络膜成纤维细胞 人 DMDM 贴壁

EC730 QBI-293A 腺病毒包装人胚肾细胞 人 DMDM 贴壁

EC731 OVHM 小鼠卵巢癌 小鼠 1640 贴壁

EC732 WEHI-3B 小鼠髓样单核白血病细胞 小鼠 1640 悬浮

EC1166 SGC7901 人低分化胃癌细胞 人 1640 贴壁

EC733 HSC-2 人口底癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC734 HRCEC 人视网膜微血管内皮细胞 人 DMEM 贴壁

EC735 RBMVEC 大鼠脑微血管内皮细胞 人 1640 贴壁

EC736 TE-13 人食管癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC737 HPAC 人胰腺癌细胞 人 1640 贴壁

EC739 HS766T 人胰腺癌细胞 人 1640 贴壁

EC740 HVSMC 人血管平滑肌细胞 人 DMEM 贴壁

EC741 BT20 人乳腺癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC742 A101D 人黑色素瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC765 SF126 人脑瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC744 CAL62 人甲状腺癌细胞 人 F12K 贴壁

EC767 UMUC3 人膀胱癌细胞 人 1640 贴壁

EC801 A673 人横纹肌瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC743 C518 大鼠膝关节退变软骨细胞 大鼠 DMEM/F12 贴壁

EC766 RS1 大鼠皮肤成纤维样细胞 大鼠 DMEM 贴壁