人间充质干细胞无动物源培养基

    百恩维的人间充质干细胞无动物源培养基根据人间充质干细胞的生长需要，培养基包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质以及其他补给成分。非常适用于培养人脐带间充质干细胞，人骨髓间充质干细胞，人脂肪间充质干细胞等间充质干细胞。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定，使用该培养基能使人间充质干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化（至少10代以内）。

★ 产品货号

BW110024

★ 产品内容

★ 使用注意事项

1.在配制完全培养基前，请把间充质干细胞无动物源生长添加剂(MSCGS-sf)、青霉素-链霉素(P/S)放到2-8℃冰箱过夜解冻，然后加入到基础培养基中。

2.在使用完全培养基前，需要把培养基放到37℃恒温水浴中预热，注意温度不要超过37℃。

3.请把配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存，并尽量在一个月内使用完。若培养基要分几次使用，请将间充质干细胞无动物源生长添加剂(MSCGS-sf)、青霉素-链霉素 (P/S)解冻按用量分装后保存。

4.可不包被培养瓶，但配合贴壁材料Attachin（货号BW110028）使用效果更佳。

★ 培养条件

37℃，5% CO2，无菌恒温培养箱培养。

★ 相关操作

间充质干细胞复苏

1.把人间充质干细胞无动物源培养基放入37℃水浴中预热；
2.从液氮中取出间充质干细胞迅速放入37℃水浴快速解冻（解冻后不要继续孵育细胞）；
3.在超净台中加入5ml的人间充质干细胞无动物源培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4.弃上清，加入5ml的人间充质干细胞无动物源培养基重悬细胞，转移到T-25培养瓶中（带滤芯）；
5.将培养瓶置于37℃，5% CO2的无菌恒温培养箱中培养；

6.4-6小时后，用新鲜的人间充质干细胞无动物源培养基给细胞换液。

间充质干细胞传代培养

1.在显微镜下观察细胞（细胞生长在人间充质干细胞无动物源培养基中，且是次传代），当细胞融合度超过80%时，即可传代；

2.37℃水浴预热培养基；

3.在超净台中，弃掉T-25细胞培养瓶中的培养基，加入2ml PBS清洗，再加入1ml 0.25%胰酶-EDTA消化细胞；

4.在显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5ml人间充质干细胞无动物源培养基终止消化；

5.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

6.将细胞转移到15ml离心管中，1000rpm离心5min；

7.弃上清,加入15-20ml的人间充质干细胞无动物源培养基重悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例传到 T-25细胞培养瓶中。确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间，细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶），混合细胞悬液，确保细胞均匀分布；

8.将细胞培养瓶置于37℃，5% CO2的无菌恒温培养箱中培养；

9.每两天用新鲜、预热的人间充质干细胞无动物源培养基进行换液。

间充质干细胞冻存

间充质干细胞冻存可用百恩维的“无DMSO无动物源细胞冻存液”,具体操作如下。

1. 细胞消化和计数，用胰酶对待冻存的细胞进行消化，并对细胞进行计数。

2. 1000rpm离心5分钟，去掉上清。

3. 根据细胞计数的情况，加入适量的冻存液，使细胞密度在1×106/ml左右（或根据自己希望达到的细胞密度）。

4. 轻轻地重悬细胞（务必重悬均匀），将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管（需提前做好标记或者贴上标签）中，旋紧冻存管盖。

5. 将冻存管放入程序降温冻存盒中，然后将冻存盒直接放入-80℃。

6. 第二天将细胞从-80℃转移到液氮中。

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