微球菌核酸酶

产品及特点

Micrococcal Nuclease（微球菌核酸酶）是一种内切核酸酶，作用于单链及双链核酸，生成3′磷酸末端。对单链核酸的作用较好，能较好地分解DNA或RNA的富含AT或AU区域。本酶不需要Mg2+，其催化作用需要Ca2+的存在。 本酶主要用作：

1. 细胞粗抽提液中核酸的水解。

2. 为制备核小体（Nucleosome）时消化分解染色质（Chromatin）。纯度

1. 50 U的本酶和1 μg的λDNA在Mg 存在下，37℃反应10分钟，DNA的电泳谱带不发生变化。

2. SDS-PAGE: ＞95%。

使用及效果

DNA的片段化

3. 在微量离心管中配制下列反应液。

DNA 100 μg

10×Buffer 5 μl

Micrococcal Nuclease 2U

dH2O up to 50 μl

4. 37℃反应数分钟（通过预实验确定具体反应时间）。

5. 加入5 μl的 200 mM EGTA（或 EDTA）停止反应。

6. 加入5 μl（1/10量）的 3 M NaOAC（pH5.2）。

7. 加入125 μl（ 2.5倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。

8. 离心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。

备注

本酶的活性严格依赖于Ca2+的存在，用EDTA或EGTA可以终止反应。微球菌核酸酶来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ) ，是一种非特异性的核酸内切酶和核酸外切酶。该酶从重组 E. coli 菌株纯化得到，可消化双链、单链、环化以及线性的核酸。在 pH 7.0-10.0 的范围内，微球菌核酸酶均有活性，无论对于 DNA 底物还是 RNA 底物，其最适 pH 值均为 9.2。微球菌核酸酶偏向于切割富含腺苷酸、脱氧腺苷酸或胸腺苷酸的底物。酶切 DNA 和 RNA底物产生带有 3 磷酸的单核苷酸和二核苷酸。