枯草杆菌BS168菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 枯草杆菌BS168菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。枯草杆菌BS168菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 枯草杆菌BS168菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC691 M059K 人胶质瘤细胞 人 EMEM 贴壁

EC692 C1498 小鼠急性淋巴瘤细胞 小鼠 DMEM 悬浮

EC693 SNU878 人肝癌细胞 人 1640 贴壁

EC694 SNU886 人肝癌细胞 人 1640 贴壁

EC708 NCI-H1417 人小细胞肺癌细胞 人 1640 贴壁

EC695 HNSC 人神经干细胞 人 DMEM 贴壁

EC709 2BS 人胚肺成纤维细胞 人 EMEM 贴壁

EC710 HIBEpiC 人肝内胆管上皮细胞 人 1640 贴壁

EC711 hUC-MSC 人脐带间充质干细胞 人 DMEM 贴壁

EC696 MBT-2 小鼠膀胱癌细胞 小鼠 1640 贴壁

EC698 32D Clone3 小鼠骨髓淋巴母细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC699 A-72 犬癌细胞 犬 1640 贴壁

EC712 BaF3 小鼠原B细胞 小鼠 IMDM 悬浮

EC435 IR983F 大鼠骨髓瘤细胞 大鼠 IMDM 悬浮

EC713 SF9 昆虫卵巢细胞 昆虫 Graces Insect medium 悬浮+贴壁

EC714 Ishikawa 人子宫内膜癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC738 HCEC 人角膜上皮细胞 人 1640 贴壁

EC715 HCC1500 人乳腺管癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC716 Th17 小鼠辅助性T细胞 小鼠 1640 悬浮

EC717 Tregs 小鼠调节T细胞 小鼠 1640 悬浮

EC718 HM1900 人小胶质细胞 人 DMEM 贴壁

EC719 NIT-1 小鼠胰岛素瘤β细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC750 NCI-H187 人视网膜母细胞瘤细胞 人 1640 悬浮

EC721 MARC-145 猴肾细胞 猴 DMEM 贴壁

EC722 ROMAS 人Burkkit淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮

EC723 TH1 小鼠调节T细胞 小鼠 1640 悬浮

EC724 PT67 小鼠逆转录病毒包装细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC725 OCI-AML4 人急性髓系白血病细胞 人 IMDM 悬浮