RNA Red RT-LAMP Mix

描述：该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计， 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 反 转录酶、Rnase Inhibitor，在 RNA 的 LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA 的 LAMP 扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品，以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP、 Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样 品为红色；2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测；2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管（阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色，A3821）。 货 号 名 称 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意：Bst4.0+ Polymerase：2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase、20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor、22%海藻糖，不含甘油，可用于冻干。 储存：长期保存于-20℃，可保存 2 年。短期保存置于 4℃， 保存 3 个月，避免反复冻融。 使用方法： 1. 配制反应体系 在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、 LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后，置于 60~68°C（首次实验采用 65°C） 进行反应 20~45min。 3. 引物及酶制品的冻干（可参考） Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理，获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 的 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品，并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

LAMP（Loop-mediated isothermal amplification）是一种新型的滚环扩增技术,在恒温条件下，呈指数级别放大核酸分子，30分钟内将DNA放大109~1010倍。其快速、恒温的独特技术优势，使得LAMP技术成为开发诊断试剂的明星潜力技术。由于在LAMP扩增中用到很高浓度的引物，因此难免保证有少量错配和引物Dimer，这些轻微的污染都会导致LAMP高速的扩增中造成假阳性检测。依托独有的显色技术和阴性控制技术建立了全新的LAMP检测平台，包括RNA RT-LAMP Mix、DNA LAMP Mix、DNA Hot LAMP Mix，该系列试剂均可用于黄红变色、橙绿变色和荧光检测。 RNA RT-LAMP Mix系专为RNA样本的LAMP扩增反应设计，制品中Bst 4.0+ Polymerase中包含Bst 2.0 DNA聚合酶、极耐热 ThermoStable V反转录酶、Rnase Inhibitor，在RNA的LAMP扩增中无需再加入任何其它酶制品即可用于RNA的LAMP扩增。DNA LAMP Mix系专为DNA样本的LAMP扩增反应设计，制品中包含Bst 2.0 DNA聚合酶及海藻糖等，用于建立以DNA为模板的LAMP扩增；DNA Hot LAMP Mix中的Bst 7.0 DNA Polymerase为经重构架设计的Bst DNA聚合酶，其保留了Bst DNA聚合酶的链置换活性，并提高了其温度耐受性，该酶可以耐受85℃。这种短暂的高温耐热性能使得LAMP扩增更具有更高的灵敏度、免核酸提取等优势。该系列产品聚合酶中不含有甘油成分，因此可用于建立LAMP引物mix与酶制品的冻干品，以提高LAMP检测制品的稳定性和易用性。

主要特征

快速检测：可在20~40min内完成检测。 灵敏度高：在最优条件下可检测到单拷贝，稳定检测10拷贝。 特异性高：六条特异性引物，保证了产物的特异性和检测的可靠性。 操作简单：恒温检测。 匹配便携式小型设备、可野外操作。

以2019-nCov核酸扩增为例比较三种方法的性能

红黄变色可视化 （Cat.No.:A3825-16） 橙绿变色可视化 （Cat.No.:A3825-26） 荧光法 （Cat.No.:A3825-36） 试剂信息 试剂信息 靶标均为N基因，冻干Assay均相同。搭配不同Buffer实现不同的显色。 冻干品，可室温运输。 基础试剂均为RNA RT LAMP Mix (A3825)。 检测方法 肉眼观测 肉眼观测 SYBR Green荧光 检测设备 水浴锅、金属浴、PCR仪 水浴锅、金属浴、PCR仪 定量PCR或恒温荧光仪 阳性判读方式 黄色为阳性 绿色为阳性 有扩增曲线为阳性 反应温度 65℃ 65℃ S65℃ 反应时间 30min 20min 15-18min 灵敏度（100%检出） 10 copies/test 10 copies/test 10 copies/test 单copy检出率 10-30% 30-50% 30-50% 假阳性比例 <1% <1% <1% 抗杂质能力 +++ +++++ +++++ 操作通量 不适宜大量样本 可高通量检测 30-50%

实例展示

1、HZ3825-01 红黄变色反应（肉眼观察） 以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 30min 后。

2、HZ3825-02 搭配 OG 橙绿变色反应管（A3821）（肉眼观察） 以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 20min 后。

3、HZ3825-02 用于浊度检测（肉眼观察或采用浊度仪） 以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 30min 后。

4、HZ3825-03 用于荧光检测（便携式恒温检测仪） 以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 26min 后。