大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)plysS菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)plysS菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)plysS菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)plysS菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC122 HeLa 229 人宫颈癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC123 ME-180 人子宫颈表皮癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC124 MS751 人子宫颈表皮癌细胞 人

EC125 SiHa 人子宫颈鳞癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC126 JAR 人胎盘绒毛癌细胞 人

EC127 JEG-3 人绒毛膜癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC128 RD 人恶性胚胎横纹肌瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC129 A-375 人恶性黑色素瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC130 A-431 人表皮癌细胞 人 IMDM 贴壁

EC131 TE-1 人食管癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC132 WERI-Rb-1 人视网膜神经胶质瘤细胞 人 1640 悬浮

EC133 GBC-SD 人胆囊癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC134 Ca Ski 人宫颈癌肠转移细胞 人 1640 贴壁

EC135 Caco-2 人结直肠腺癌细胞 人 IMDM 贴壁

EC136 HT-29 人结肠癌细胞 人 McCoy’s 5a 贴壁

EC137 LoVo 人结肠癌细胞 人 F12K 贴壁

EC138 LS 174T 人结肠腺癌细胞 人

EC139 NCI-H716 [H716] 人结直肠腺癌细胞 人 1640 悬浮

EC140 RKO 人结肠腺癌细胞 人 EMEM 贴壁

EC141 RKO-AS45-1 人结肠癌转基因细胞 人

EC142 RKO-E6 人结肠癌转基因细胞 人

EC143 SW1116 人结肠腺癌细胞 人

EC144 SW480 [SW-480] 人结肠腺癌细胞 人 L15 贴壁

EC145 SW620 人结肠癌细胞 人 L15 贴壁