产品内容：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入50 mL 蒸馏水充分溶解。

产品说明：

    糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。

糜蛋白酶催化ATEE水解，产物在237nm有特征光吸收；通过测定237nm光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。

试验所需自备仪器和样品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、 1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清即粗酶液。

二、测定：

1. 分光光计预热 30 min 以上，调节波长到 237 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中保温30min。

3. 空白管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 试剂一，1000μL 试剂二，充分混匀，于237nm 处测定4min内吸光值变化，记为△A空白管。（从吸光值稳定增加开始计时）

4. 测定管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 粗酶液，1000μL 试剂二充分混匀，于237nm 处测定4min内吸光值变化，记为△A测定管。（从吸光值稳定增加开始计时）

注意：空白管只需要测定一次。

三、糜蛋白酶活性计算：

(1) 按蛋白浓度计算
活性单位定义： 25度每毫克蛋白每分钟催化 吸光值增加1为一个酶活单位。

糜蛋白酶活(U/mg prot)= [ (△A 测定管-△A 空白管)×V 反总] ÷(Cpr×V1)÷T

=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），100μL=0.01 L； Cpr：粗酶液蛋白浓度（ mg/mL），需要另外测定；V 反总：反应总体积，1100μL =1.1 mL； T：反应时间，4 min。

（2）按样本质量计算
活性单位定义：25度每毫克蛋白每分钟催化 吸光值增加1为一个酶活单位。

糜蛋白酶活(U/g)= [ (△A 测定管-△A 空白管)×V 反总] ÷(W×V1÷V 2)÷T

=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），100μL=0.01 L； V 反总：反应总体积，1100μL =1.1 mL；W，样本质量，g；T：反应时间，4 min。

注意事项：

1. 临用前配置的试剂配置好后3天内使用完毕。