Amplite™小鼠载脂蛋白E（ApoE）试剂盒*针对ELISAPro自动ELISA处理进行了优化*

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简要概述

Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂，以方便，可靠，特异的方式方便地定量测定血清，血浆和细胞培养上清液中的分析物。

ELISA测定原理

ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体（mAb）。样品中的分析物被包被的mAb捕获，并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP（SA-HRP）检测。注：TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应，并且可以使用ELISA板酶标仪定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。

所需材料

1. 酶标仪可在450 nm读取
2. ELISA平板清洗器；自动或手动（例如，多移液管或喷射瓶）、精密移液管，吸头和量筒
3. 用于标准和样品稀释的试管
4. 蒸馏水或去离子水

安全信息

Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）对眼睛和皮肤有刺激性，应小心处理。由于不知道暴露的影响，因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG（0.002％），这是一种潜在的过敏原，可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息，请查阅我们网站上的《安全数据表》。

制备

在开始测定之前，让板和测定试剂达到室温（TMB底物除外，最好使用冷底物）。
计划板布局，使其一式两份，包括标准曲线，样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。

产品说明书

样品实验方案

储备溶液配制

1.洗涤缓冲液
将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中（足以完成1个板的所有洗涤步骤）。如果在20倍浓缩物中形成了晶体，则将其升至室温并轻轻混合以溶解。

2.样品稀释液
通过用蒸馏水或去离子水将样品稀释液浓缩液稀释5倍来准备所需体积的样品稀释液。对于每个板，将30 ml样品稀释液添加到120 ml水中。

3.样品
所有样品均应在样品稀释液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释，应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。含有超出分析标准范围的高水平分析物的样品将需要进一步稀释。

4.小鼠血清/血浆稀释指南
根据对BALB / c和C57BL / 6样品的重复分析，我们建议稀释倍数为10,000X。精确的移液非常重要，在稀释步骤之间更换吸头，并使用新鲜制成的稀释液。试剂的含量足以重复使用。

5. ELISA标准
通过添加1 ml标准重构缓冲液将ELISA标准液重构为0.5μg/ ml的原液。不要搅拌。让标准液溶解20分钟并彻底混合。标准液应等份保存在-20°C下。避免重复冻融循环。

6.编制标准曲线
如图所示，稀释标准储备溶液以创建标准曲线。指示的数量足以重复。最后一个样品瓶用作测定背景对照，即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。

工作溶液配制
1.检测抗体
使用后15分钟内，将检测抗体在Apo ELISA缓冲液中稀释至1μg/ ml的浓度。对于每个板，在12 ml Apo ELISA缓冲液中稀释24μl检测抗体。

2.链霉亲和素
在使用后的15分钟内，将抗生蛋白链菌素-HRP用抗生蛋白链菌素-HRP稀释剂稀释1000倍。对于每块板，在12 ml的链霉亲和素-HRP稀释液中稀释12μl的链霉亲和素-HRP。

操作步骤

1. 添加样品（至少稀释2倍），标准液和测定背景对照（100μl/孔）。敲击板混合。用粘性板盖覆盖板，并在室温下孵育1小时。
2. 如上所述清洗板。
3. 添加检测抗体（100微升/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
4. 如上所述清洗板。
5. 加入抗生蛋白链菌素-HRP（100μl/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
6. 如上所述清洗板。
7. 添加TMB底物（100微升/孔）。在避开直射光的室温下孵育15分钟。
8. 向所有孔（100μl/孔）中添加Stop溶液以停止显影。
9. 在15分钟内测量450 nm处的吸光度。