Fast DNA Probe qPCR Mix

 描述：本制品是采用探针法进行 Real-Time PCR 的专用试 剂，适合于 FAM/HEX/TET/JOE/ROX 等双标记探针（本 品也适用于 Molecular Beacon 探针），其中 5×Fast DNA Probe qPCR Mix 是将热启动 Fast Taq DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混的 5×浓度的单组分预混试 剂。进行实验时，PCR 反应液的配制十分方便简单，只 需加入引物、探针、模板、水即可。该制品不含有 ROX 校正染料，适用于各种荧光标记探针，并且适用于各种定 量 PCR 机型。 制品中的 Fast Taq DNA 聚合酶采用专有的热启动技 术确保 55℃以下没有任何活性，因此可在室温建立反应 体系。Fast Taq DNA 聚合酶具有卓越的扩增速度，因此满 足快速 PCR 程序，通常在 30min 以内可以完成扩增反应。 同时该聚合酶具有耐受杂质的能力，同样适用于粗制核酸 样本的扩增反应。 包装 规 格 250T 1000T 5×Fast DNA Probe qPCR Mix 1 ml 1 ml×4 储存： 1. 长期保存，请避光置于-20℃或-70℃可保存３年。 2. 经常使用，融化后可置于 4℃，可保存 1 年。 TaqMan 荧光定量 PCR 试剂盒 操作方法 1、按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系： 终浓度 5×Fast DNA Probe qPCR Mix 4 μl 1× PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM Probe (10 μM) 0.2 μl 0.1 μM DNA 模板 0.5~2 μl ddH2O Up to 20 μl (1)反应体系中引物终浓度为 0.2 μM 即可得到较好的扩增效果。当 反应性能比较差时，可以调整其终浓度 0.1 ~ 1.0 μM。 (2)探针的浓度在 50~250 nM 之间调整；在双探针检测时通常探针 用量减半，扩增引物浓度保持不变。 (3) qPCR 灵敏度极高, 建立反应体系时加入模板量的准确程度对 最终定量结果会有很大的影响。建议将模板稀释后加入反应体系 中，这样可以有效提高实验的重复性，建议 DNA 使用 10-100 ng。 (4) 如模板类型为未稀释 cDNA 原液，使用体积不应超过 qPCR 反 应总体积的 1/10。 2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下： Stage 1: 95℃ 30s Stage 2: 95℃ 5s 60℃ 20s（收集荧光信号） 40 cycles 注意：（1）预变性 30s 适合绝大多数扩增反应，如模板结构复杂， 可将预变性时间延长至 3 min。 （2）对于 200 bp 以内的片段，延伸时间最短可设为 10 sec；超过 200 bp 时，推荐延伸时间为 20-30 sec。 3. 反应结束后确认扩增曲线和标准曲线。 探针设计原则 1. 探针位置尽可能地靠近上游引物 2. 探针长度应在 15-45bp（最好是 20-30bp)，以保证结合特 异性 3. 探针 Tm 值在 65-70℃，通常比引物 TM 值高 5-10℃（至 少要 5℃），GC 含量在 40%－70% 4. 探针的 5’端应避免使用 G，因为 5G 会有淬灭作用。 5. 整条探针中，C 的含量要明显高于 G 的含量；避免 出现重复的碱基。 6. 为确保引物探针的特异性，最好将设计好的序列 blast 中核实一次，如果发现有非特异性互补区， 建议重新设计引物探针。

5×Fast DNA Probe qPCR Mix是采用探针法进行Real-Time PCR的专用试剂，适合于FAM/HEX/TET/JOE/ROX等双标记探针（本品也适用于Molecular Beacon探针），其中5×Fast DNA Probe qPCR Mix是将热启动Fast Taq DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP染料等试剂预混的5×浓度的单组分预混试剂。进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、模板、水即可。该制品不含有ROX校正染料，适用于各种荧光标记探针，并且适用于各种定量PCR机型。 5×Fast DNA Probe qPCR Mix中的Fast Taq DNA聚合酶采用专有的热启动技术确保55℃以下没有任何活性，因此可在室温建立反应体系。Fast Taq DNA聚合酶具有卓越的扩增速度，因此满足快速PCR程序，通常在30min以内可以完成扩增反应。同时该聚合酶具有耐受杂质的能力，同样适用于粗制核酸样本的扩增反应。

组分

名称 250T 1000T 5×Fast DNA Probe qPCR Mix 1ml 1ml*4

主要特征

热启动酶采用专有的修饰方式，30s热启动 单组份预混液，使用方便 卓越的扩增性能，耐受样本中的杂质能力强 高灵敏度，可检测低丰度基因 适用于所有实时定量PCR仪器

应用

DNA和cDNA的相对定量检测。

注意事项

储存

1. 长期保存，请避光置于-20℃或-70℃可保存３年。 2. 经常使用，融化后可置于4℃，可保存1年。

反应实例

以人MCF7细胞提取的总RNA（1.28 pg-20 ng）为模板进行反转录,反转录后分别取2 μl cDNA产物，应用5xFast DNA Probe qPCR Mix进行qPCR，扩增结果如图A: 扩增曲线；B：标准曲线。1-7RNA模板分别为：20 ng、4 ng、0.8 ng、0.16 ng、0.032 ng、6.4 pg和H2O。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！