转基因农作物基因组DNA提取试剂盒

中文名称：转基因农作物基因组DNA提取试剂盒
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from GMO
产品规格：200次
本试剂盒是特别针对GMO作物（转基因作物)PCR检测所开发的试剂盒。试剂盒A部分所含有的独特裂解液可针对性地将小麦、玉米、水稻、棉花和大豆五种主要作物的组织充分裂解，释放出核酸、蛋白质等相关组分，后续通过特效的RNA酶和酚/氯仿抽提可以最大限度的将RNA、蛋白质、金属离子等杂质除去，获得纯度和得率均良好的基因组DNA，以便于后续的PCR检测。

本试剂盒包含双组分简单型PCR反应系统，包含2×GMO PCRBuffer和GMO DNA Polymerase。GMO DNAPolymerase是采用抗体修饰的耐热聚合酶，2×GMO PCR Buffer中含有MgCl2、dNTPs、PCR反应稳定剂、优化剂和增强剂等多种成分，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，适用于GMO作物的转基因PCR检测。

产品特点：
·适用性广：可对五大主要GMO作物进行高质量基因组DNA的提取。
·简单快速：可在2h内完成GMO作物基因组DNA的提取。无需大型冷冻离心机，对仪器设备要求较低，适于各级研究机构对GMO作物进行快速基因组DNA提取。
·高效特异：独特的抗体Taq聚合酶的缓冲液确保聚合酶高效扩增，比普通Taq聚合酶特异性更强。

提取实例：

分别对水稻、玉米、大豆、棉花和小麦的100mg叶片进行基因组DNA提取，重复2次。100μl洗脱，取3μl电泳，琼脂糖凝胶浓度为2%，6V/cm电泳20min。

分别对水稻、玉米、大豆、棉花和小麦的基因进行扩增，重复2次。20μl PCR反应体系，取6μl电泳，琼脂糖凝胶浓度为2%，6V/cm，电泳20min。

试剂盒组成：

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段较小且提取量下降。
2．建议采用新鲜叶片作为提取对象，基因组DNA得率和纯度易达到最佳水平。
3．所有的离心步骤都为使用台式离心机在室温下进行。
4．缓冲液PL在使用前请加入巯基乙醇，使巯基乙醇的终浓度为0.1%（V/V）。

使用方法：
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．取植物新鲜组织约100mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分碾磨。
2．将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μl 65℃预热缓冲液PL的离心管中（实验前在预热的缓冲液PL中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3．将离心管取出，轻甩以收集管盖及管壁上的液滴，加入6 μl RNase A（100mg/ml），混匀，室温放置10 min。
4．加入等体积苯酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），充分混匀，12000rpm （~13400×g )离心5 min。
  注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可再用等体积酚:氯仿（1:1)进行二次抽提。
5．小心地将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入等体积异丙醇，充分混匀。
6．12000rpm（~13400×g )离心5 min。
7．倒掉上清，加入500 μl 70％乙醇，充分混匀。
8．12000rpm（~13400×g )离心5 min。
9．重复步骤7、8。
10．将离心管倒置在干净的吸水纸上至乙醇挥发干净，确保沉淀在离心管中。
  注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。但是要避免过分干燥DNA沉淀，因为过于干燥的DNA很难溶解。
11．加入100 μl洗脱缓冲液TE进行DNA溶解，适当条件保存。
  注意：如果DNA溶解缓慢，可65℃加热10-30 min加速溶解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DN**段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DN**段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！