3173 DNA Polymerase-生物分子-试剂-生物在线
上海沪震实业有限公司
3173 DNA Polymerase

3173 DNA Polymerase

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产品名称: 3173 DNA Polymerase

英文名称: 3173 DNA Polymerase

产品编号: HZ3602A

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产品产地: 中国/上海

品牌商标: 沪震生物

更新时间: 2023-08-17T10:24:20

使用范围: null

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3173 DNA Polymerase

描述:该制品系专为 RNA 样本的 LAMP 扩增反应设计, 制品中 Bst 4.0+ Polymerase 中包含 Bst 2.0 DNA 聚合 酶、 极其耐热 ThermoStable V 转录酶、Rnase Inhibitor,在 RNA LAMP 扩增中无需再加入任何其它 酶制品即可用于 RNA LAMP 扩增。除此外,Bst4.0+ DNA Polymerase 聚合酶中不含有甘油成分,因此可用于 建立 LAMP 引物 mix 与酶制品的冻干品,以提高 LAMP 检测制品的稳定性和易用性。 Bst 4.0+ Polymerase 可搭配不同的反应 Buffer 从而 实现不同的显色与检测方式。三种Buffer均已包含dNTP Mg 2+和相应的反应缓冲盐。其中 2xRed LAMP BufferD 用于红黄变色反应,扩增完毕后阳性样品为黄色,阴性样 品为红色;2xSG LAMP BufferD 包含 SYBR Green 染料 用于实时荧光检测;2xLAMP BufferD 用于浊度分析、浊 度仪或搭配 OG 橙绿变色反应管(阳性样本为绿色、阴性 样本为橙黄色,A3821)。 A3825 Bst4.0+ Polymerase (250 μl) A3825-01 2xRed LAMP BufferD (1 ml) A3825-02 2xLAMP BufferD (1 ml) A3825-03 2xSG LAMP BufferD (1 ml) 注意:Bst4.0+ Polymerase2.5μl 该制品包含 8U Bst2.0 DNA Polymerase20U ThermoStable V反转录酶、8U Rnase Inhibitor22%海藻糖,不含甘油,可用于冻干。 储存:长期保存于-20,可保存 2 年。短期保存置于 4 保存 3 个月,避免反复冻融。 使用方法: 1. 配制反应体系 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂 2xLAMP BufferD 10 μl Bst4.0+ Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer Mix 2 μl 模板 RNA X μl ddH2O 到总体积 20 μl 10xLAMP Primer Mix 浓度:FIP/BIP 分别为 16 μM LoopF/B 分别为 4 μMF3/B3 分别为 2 μM 2. 反应体系配好后,置于 60~68°C(首次实验采用 65°C 进行反应 20~45min 3. 引物及酶制品的冻干(可参考) Bst4.0+ DNA Polymerase 2.5 μl 10xLAMP Primer 2 µl 45%海藻糖 0.5 μl Total 5 μl 将该制品进行冻干处理,获得冻干品。 4. 冻干制品的 LAMP 扩增 向一份冻干品中加入 10 μl 2x Red LAMP BufferD 溶解冻 干制品,并加入最多 10 μl 的检测 RNA 模板(总体积为 20 μL) 进行 LAMP 扩增。 

3173 DNA Polymerase为来源于病毒的热稳定型DNA聚合酶,通过点突变修饰,使其3’-5’外切活性缺失(exo-形式)而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚合酶活性,还具有依赖于RNA的逆转录活性,因此可用于单管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性,可用于DNA或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中,可实现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板,可通过92度加热3s来得到好的扩增效果,而Bst pol在此温度加热后导致扩增活性丧失。
3173 DNA 聚合酶在95°C条件下的半衰期为20min,因此PCR的起始预变性时间通常为1~2min。该酶搭配两种Buffer:10×3173 Isothermal Buffer和5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer用于恒温PCR扩增,其反应温度不能超过70°C。 5×Best PCR Buffer用于常规PCR扩增,94°C预变性时间不可超过5min。

主要特征

  • 同时具有较强的延伸能力和逆转录活性
  • 耐热性能极强,对于复杂模板的扩增活性强
  • 强烈的链置换活性,可应用于LAMP检测

组分

组分名称 数量
3173 DNA Polymerase (5 U/μl) 50 μl/500 μl
10×3173 Isothermal Buffer 1 ml/5 ml
5×Best PCR Buffer 1 ml/5 ml

单位定义

一个活力单位即在65°C条件下,30分钟内催化25nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

应用

  • 恒温PCR扩增
  • DNA LAMP和RT-LAMP
  • 链置换基因合成
  • 在60-70度之间具有反转录活性,可用于单管RT-PCR

储存

-20℃可保存3年。

使用方法

1.以DNA为模板进行PCR扩增
反应体系配制
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
5×Best PCR Buffer                                    10 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)                        4 μl
模板DNA                                              1ng~1ug
上游引物(10 μM)                                       5 μl
下游引物(10 μM)                                       5 μl
ddH2O                                              Up to 50 ul
PCR扩增循环参数 
循环数 温度 时间
1st Cycle 90°C 2min
25-40 Cycles 90°C 15s
Tm 15s
72°C 1kb/1min
Last Cycle 72°C 5min
2.以RNA为模板进行RT-PCR扩增
反应体系配制
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
5×Best PCR Buffer                                    25 μl
dNTP Mixture (10 mM each)                        5 μl
模板RNA                                            10ng~1ug
上游引物(10 μM)                                     2 μl
下游引物(10 μM)                                     2 μl
ddH2O                                           Up to 50 ul
PCR扩增循环参数 
循环数 温度 时间
1st Cycle 60°C 60min
35 Cycles 90°C 15s
57°C 15s
72°C 1kb/1min
Last Cycle 72°C 5min
3.缺刻恒温PCR扩增
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
10×3173 Isothermal Buffer                           5 μl
dNTP Mixture (10 mM each)                        5 μl
模板DNA                                            10ng~1ug
引物(500 μM)                                           5 μl
ddH2O                                             Up to 50 μl
55°C孵育2~8h。

 

 

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!